PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒產品說明書

【資料簡介】

PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒產品說明書

 

主要用途

 

 PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結合而產生熒光信號來定量樣品中DNA含量的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環境中DNA含量分析。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，高度敏感。

 

技術背景

 

作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結合，產生熒光信號。PicoGreen技術可以檢測到低達0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號強度（Intensity）或相對熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發熒光（Autofluorescence）忽略不計，重復性標準差異（Standard Deviation）低，不受樣品化學成分的干擾。

 

產品內容

 

染色液（Reagent A）       62.5微升

稀釋液（Reagent B）       15 毫升

標準液（Reagent C）            1毫升

產品說明書                 1份

 

保存方式

 

保存染色液（Reagent A）和標準液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板：用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于熒光定量分析

 

實驗步驟

 

• 測定準備

 

• 準備好待測樣品，置于冰槽里
• 設定好熒光分光光度儀（溫度為37℃）：激發波長480nm，散發波長530nm，并置零 
• 實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀釋液（Reagent B）到新的15毫升離心管，加入25微升染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標記為染色工作液，放在暗室里。然后進行下列操作。

 

• 構建標準曲線

 

• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
• 分別加入500微升稀釋液（Reagent B）到每個離心管
• 移取500微升標準液（Reagent C）到1號管，混勻
• 小心移取500微升1號管稀釋的標準液（Reagent C）到2號管，混勻
• 小心移取500微升2號管稀釋的標準液（Reagent C）到3號管，混勻
• 小心移取500微升3號管稀釋的標準液（Reagent C）到4號管，混勻
• 將1至5號管放進冰槽里備用；標準管含量見下表

 

管號	緩沖液（Reagent B）	標準液（Reagent C）	標準DNA總量
1	500微升	500微升	1微克
2	500微升	500微升1號管	0.5微克
3	500微升	500微升2號管	0.25微克
4	500微升	500微升3號管	0.125微克
5	500微升	空對照	0

 

• 移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
• 加入500微升上述配制的標準液
• 室溫下，孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
• 重復實驗步驟8至11四次
• 繪制標準曲線：縱座標（Y軸）為相對熒光單位（RLU）；橫坐標（X軸）為DNA含量（微克）

 

• 樣品檢測

 

• 移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
• 加入500微升待測樣品
• 室溫下，孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
• 根據標準曲線獲得樣品對應DNA含量（微克）
• 樣品實際DNA濃度：

[根據標準曲線獲得樣品對應DNA含量（微克）X樣品稀釋倍數]0.5（樣品容量；毫升）=微克/毫升

 

 

注意事項

 

• 本產品為20次（比色皿）和100次（96孔板）操作，包括標準曲線測定
• 操作時，須戴手套
• 使用新鮮配制的染色工作液，務必不要超過2小時，且注意避光
• 建議使用塑料管配制染色工作液，而不是玻璃制品
• 孵育時，避免光照
• 系統檢測，標準曲線測定1次即可；如果儀器更換，則需要重新測定1次
• 如果熒光讀數過高，可以相應稀釋樣品量
• 可以使用熒光酶標儀檢測，試劑用量和體系均除以5，包括標準DNA含量，其計算公式：

 

[根據標準曲線獲得樣品對應DNA濃度（微克）X樣品稀釋倍數]÷0.1（樣品容量；毫升）＝微克/毫升

 

• 鹽類、尿素、乙醇、lv仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈DNA和RNA不會干擾檢測
• 本公司提供系列DNA檢測試劑產品

 

質量標準

 

• 本產品經鑒定性能穩定

本產品經鑒定高度敏感