組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒產品說明書

【資料簡介】

SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS50556.2 v.A

組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑是一種旨在通過偶氮生色底物，與還原后的一價銅反應產生藍色螯合復合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化，即采用比色法來測定樣品中總銅濃度的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物和人體組織裂解懸液樣品中總銅的濃度檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，檢測敏感。

技術背景

銅為人體營養中的必需的微量元素。作為輔因子，含銅酶蛋白在鐵和兒茶酚胺（catecholamine）代謝、游離自由基清除、血紅蛋白、彈力纖維和膠原蛋白合成等活動中起著重要作用，從而調節體內氧化還原狀態銅在肝臟和血漿中以銅藍蛋白（caeruloplasmin）形式存在，具有鐵氧化酶抗氧化活性。銅含量過低，會導致智力遲鈍、色素脫失、貧血、張力減退、骨壞血病變化。一旦缺失，將導致心臟病變、骨質疏松、骨關節炎、Menkes綜合征、威爾森氏癥等。由此，銅含量檢測成為威爾森氏癥、小細胞低色素性（microcytichypochromic anemia）貧血、骨病等的診斷指標。銅的檢測包括化學法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技術，但容易受到其它金屬元素的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。4-(3,5-溴

基-2-吡啶偶氮基)-5-(N-乙基-N-磺丙基)苯胺（4-(3,5-Bromo-2-pyridylazo) -5-(N-ethyl-N-sulfopropyl)aniline；Di-Br-PAESA）比色法是一種穩定、簡便、準確的銅檢測技術。在弱酸性條件下，銅從復合物中解離出來；抗壞血酸（還原型）將解離出來的二價銅離子還原成一價銅離子，一價銅離子與顯色劑DiBr-PAESA生成藍色絡合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化（波長580nm），來定量測定細胞銅的總濃度。

其反應系統為：

產品內容

清理液（Reagent A） XX 毫升

裂解液（Reagent B） XX 毫升

去干擾液（Reagent C） XX 毫升

緩沖液（Reagent D） XX 毫升

還原液（Reagent E） XX 瓶

顯色液（Reagent F） XX 毫升

標準液（Reagent G） XX 微升

產品說明書1 份

保存方式

保存在4℃冰箱里，有效保證3 月

2

用戶自備

15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5 毫升離心管：用于樣品操作的容器

DOUNCE 勻漿器：用于組織勻化

微型臺式離心機：用于樣品制備

比色皿：用于反應的容器

分光光度儀：用于比色分析

實驗步驟

一、樣品準備

1． 手術取出動物組織，并秤重以確定500 毫克組織重量

2． （選擇步驟）放進預冷的15 毫升錐形離心管

3． （選擇步驟）加入XX 毫升清理液（Reagent A）清洗1 次

4． 移入到一個液氮凍存管

5． 即刻放進液氮罐過夜

6． 次日從液氮罐里取出，即刻（zui快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組=織凍融）

7． 放進一個15 毫升錐形離心管

8． 加入預冷的XX 微升裂解液（Reagent B）

9． 渦旋震蕩5 秒，充分混勻

10．即刻放進預冷的DOUNCE 勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約40 下）

11．轉移到預冷的1.5 毫升離心管

12．放進4℃微型臺式離心機離心5 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

13．小心移取500 微升上清液到新的預冷的1.5 毫升離心管

14．移取10 微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒－GMS30030.1）

15．加入XX 微升抗干擾液（Reagent C）

16．渦旋震蕩10 秒

17．放進4℃微型臺式離心機離心10 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

18．小心移取上清液到新的1.5 毫升離心管

19．即刻放進－70℃保存或置于冰槽里繼續后續操作

二、測定準備

1． 準備好待測樣品，置于冰槽里備用

2． 設定好分光光度儀：波長580nm（570 至590nm 波長），并置零

3． 實驗開始前，移取XX 毫升緩沖液（Reagent D）到1 瓶還原液（Reagent E）中，混勻后，標記為反應工作液，置于冰槽里備用，避免光照。

三、比色測定

1． 移取XX 毫升上述配制的反應工作液到新的1 毫升比色皿

2． 加入XX 微升標準液（Reagent E）或待測樣品

3． 上下傾倒數次，混勻

4． 37℃室溫下孵育5 分鐘，避免光照

5． 即刻放進分光光度儀檢測：獲得吸光讀數（OD）

6． 計算樣品銅濃度

XX

注意事項

1． 本產品為20 次操作，包括標準液

2． 本產品線性范圍為3 至400 微克/分升

3． 操作時，須戴手套

4． 避免使用EDTA 等處理樣本

5． 系統操作過程中，標準液測定只需1 次

6． 孵育反應完成后即刻進行比色測定

7． 比色測定后，比色皿須清洗*

8． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度

9． 用戶可以換算獲得：微克/毫克組織或蛋白；微摩爾/毫克組織或蛋白

10．微克/分升換算成微摩爾/升：微克/分升X 0.1573

11．建議用戶建立正常參考值

12．本公司提供系列銅生化檢測試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定檢測敏感

使用承諾

秉著“信譽*、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10 天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購信息

4

單組份訂購信息

編號名稱規格

GMS50556.2 組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次

GMS50556.2A 清理液（Reagent A） 100 毫升

GMS50556.2B 標準液（Reagent B） 50 毫升

GMS50556.2C 去干擾液（Reagent C） 5 毫升

GMS50556.2D 反應液（Reagent D） 20 毫升

GMS50556.2E 標準液（Reagent E） 200 微升

試劑盒訂購信息

產品編號名稱規格

GMS50556.1 細胞銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次

GMS50556.2 組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次

GMS50556.3 體液銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次

GMS50556.4 食物銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次

GMS50556.5 環境銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次

GMS50557.1 細胞銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次

GMS50557.2 組織銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次

GMS50557.3 體液銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次

GMS50557.4 食物銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次

GMS50557.5 環境銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次