雞腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯免疫分析試劑盒說明書

【資料簡介】

雞腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯免疫分析試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。用純化的雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子α(TNF-α)，再與HRP標記的腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度。
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標本要求 
．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
、雞腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯免疫分析試劑盒標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
64ng/L
5號標準品
50μl的原倍標準品加入50μl標準品稀釋液
32ng/L
4號標準品
50μl的5號標準品加入50μl標準品稀釋液
6ng/L
3號標準品
50μl的4號標準品加入50μl標準品稀釋液
8ng/L
2號標準品
50μl的3號標準品加入50μl標準品稀釋液
4ng/L
號標準品
50μl的2號標準品加入50μl標準品稀釋液
2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘.
0、雞腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯免疫分析試劑盒終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。