質(zhì)粒DNA形態(tài)的電子顯微鏡觀察

時間：2016-3-30閱讀：837

一、原理
球狀蛋白質(zhì)一般都可以在低鹽溶液或蒸餾水表面形成不溶解的變性薄膜，若濃度合適，則肽鏈伸展形成蛋白質(zhì)單分子層。一般用堿性蛋白質(zhì)包圍帶負電的核酸分子，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)展開時，核酸也隨之展開，核酸的形態(tài)結(jié)構(gòu)將保持一定的完整性。然后將核酸分子撈到支持膜上，經(jīng)過負染色，就可以在電鏡下觀察。
二、目的
觀察質(zhì)粒dna在電鏡下的形態(tài)，掌握質(zhì)粒DNA的電鏡制樣原理和方法。
三、材料、試劑和儀器
1、純化的質(zhì)粒DNA樣品。
2、火棉膠。
3、醋酸異戊酯。
4、干凈銅網(wǎng)。
5、真空噴鍍儀。
6、醋酸鈾水溶液。
7、鉑銥合金。
8、展開儲備液(0.1mg/L細胞色素C，1mol/L醋酸銨)。
9、。
10、電子顯微鏡。
四、操作步驟
1、稱取3克火棉膠溶解于100ml的醋酸異戊酯中，制成3％的溶液。
2、用滴管吸取該液，滴1－2滴于清潔的水面上，當(dāng)醋酸異戊酯揮發(fā)后，在水面上形成一層均勻的火棉膠膜。
3、用鑷子小心地將干凈的銅網(wǎng)間隔一定距離排列在膜上。
4、在這些銅網(wǎng)上輕輕覆蓋一張適當(dāng)大小的濾紙，待濾紙濕潤后將濾紙連同銅網(wǎng)、火棉膠膜輕輕撈起，銅網(wǎng)向上放于一干凈培養(yǎng)皿中晾干備用。
5、將核酸樣品（濃度為5mg/ml-10mg/ml）加到展開溶液中，終濃度為1mg/ml-0.5mg/ml，作為上相液。
6、將重蒸水注入干凈的培養(yǎng)皿中，作為下相液。
7、將干凈的載玻片斜放在培養(yǎng)皿中，在水表面撒少量，以指示單分子膜的展開情況。
8、取50ul左右的上相液，在離下相液表面1cm處輕輕滴到斜面上，使上相液緩緩觸及下相液表面并形成一層單分子膜。
9、用鑷子夾著銅網(wǎng)，膜面朝下，輕輕沾取下相液表面的核酸分子。用濾紙吸去多余的液體，晾干備用。
10、用醋酸雙氧鈾染色15分鐘，蒸餾水洗3次，每次10分鐘，晾干備用。
11、在真空噴鍍儀中用鉑銥合金投影，以進一步增加電子反差。
12、電鏡觀察。

質(zhì)粒DNA形態(tài)的電子顯微鏡觀察

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