將25g體重的蟾蜍用頸椎脫臼法殺死。殺死前2～3h，腹腔注射0.1％濃度的秋水仙素溶液(注射量以4μg/g體重計算)。殺死后，取每側的股骨和肱骨各一根，去凈外面的肌肉組織，剪去兩頭，用注射針頭吸入一些生理鹽水，將骨髓沖至一小培養皿中，反復幾次，將全部沖出物吸入離心管內離心(1000轉/min)8min。

2、低滲處理

吸去上清液，加入在37℃中預熱的0.4％KCl溶液至5ml，用吸管輕輕吸動，使細胞松散，在37℃溫度，低滲20min，離心8min(100轉/min)，在離心前加入1ml固定液作預處固定，防止細胞松散。

3、固定

吸去上清液，沾管壁加入甲醇∶冰醋酸＝3∶1的的固定液5ml，固定5min后，用吸管將沉淀物輕輕打勻，再繼續固定30min離心8min(100轉/min)。吸去上清液，再加固定液固定一次，用吸管打散靜止15～20min，離心8min(1000轉/min)吸去上清液，留沉淀物，再加少量固定液混勻，即可制片。

4、制片及染色

從冰箱中取出預冷玻片，平置在手中，然后，將標本混勻液從一定的高處滴下，并立即用口吹散，在酒精燈上加熱干燥。干燥后，將稀釋10倍的Giemsa染液(用前稀釋)滴于玻片上，染色20～30min，流水沖洗幾秒鐘，在酒精燈上干燥后，即可置于顯微鏡下觀察。

二、觀察

在高倍顯微鏡下觀察蟾蜍骨髓淋巴細胞的染色體。我們可能看到有11對(2n=2×11＝22)等臂的染色單體，每一條都呈V字形。基本形態如下圖。在顯微鏡下，染成紅色的為染色體和著絲粒，染成淺藍色的為細胞質，染色單體沒有著絲縊痕和次縊痕。

三、Giemsa 染液的配制：

1、Giemsa原液的配制（1ml）

Giemsa粉劑0.5g、甘油(A·R)33ml、甲醇(不含丙酮)(A·R)33ml。將少量甘油中加入粉劑，用研缽磨至無顆粒為止，再加入全部甘油33ml，放56℃溫箱中2h溶化后加甲醇33ml，搖勻后保存于棕色瓶中，用時稀釋10倍。

2、磷酸緩沖液（pH=7）的配制

取1/15M磷酸二氫鉀溶液38.8ml和1/15M溶液61.2ml混合后，即可得pH=7的磷酸緩沖液

骨髓細胞染色體標本的制備及觀察

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