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        巨噬細胞培養

        時間:2014-9-23閱讀:670
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        噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得,便于培養,并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,在條件適宜下可生活 2 - 3 周,多用做原代培養,難以生存。 我愛生物 5ibio

        巨噬細胞也建有無限細胞系,大多來自小鼠,如 P338D1 、 S774A.1 、 RAW309Cr.l 等,均獲惡性,培養中呈巨噬細胞形態和吞噬功能,易于傳代和瓶壁分離,但難以建株。

        培養巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞,以小鼠腹腔取材法zui為實用,其法如下:

        1、實驗前三天,向小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯 lml (勿注入腸內!),以刺流產生大量的巨噬細胞。 生物實驗網

        2、引頸處死小鼠。

        3、手提鼠尾將其全浸入 70% 乙醇中 3 - 5 秒。 做zui大zui全的生物試驗方法

        4、置動物于解剖臺,用針頭固定四肢,持鑷撕開腹部皮膚,但勿傷及腹膜壁,把皮膚拉向上下兩側,暴露出腹膜壁。

        5、用 70% 酒精擦洗腹膜壁,注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中,同時用手指從兩側壓揉腹膜壁,使液體在腹腔內流動。 

        6、用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側.使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內。

        7、小心拔出針頭,把液體注入離心管。 做zui大zui全的生物試驗方法

        8、4 ℃下 250g 離心 10 分鐘后,去上清,加 10ml Eagle 培養基。 

        9、計數細胞。每只鼠可產生 20 一 30 × 106 細胞,其中 90% 為巨噬細胞。 

        10、以 3 × 105 個貼附細胞 / 平方厘米接種。 

        11、接種數小時后,除去培養液,可去除其它白細胞,純化培養細胞,用 Eagle 液沖洗 1 一 2 次,再加新 Eagle 培養液置 CO2 溫箱中。

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