細(xì)胞增殖-毒性（CCK-8）檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞増殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。WST-8是一種類(lèi)似于MTT的化合物。在電了耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下。可以被還原生成橙黃色水溶性的甲臜(Formazan)。細(xì)胞増殖越多越快，則顏色越深：細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞.顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

使用方法：

1、 在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ul/孔).通常細(xì)胞增值實(shí)驗(yàn)每孔約2000個(gè)細(xì)胞.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔約5000個(gè)細(xì)胞.具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞増殖速度的快慢等因素決定。

2、 按照實(shí)驗(yàn)需要.進(jìn)行培養(yǎng)并給予0-10ul特定的藥物刺激，處理一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如: 6.12.24 或48 小時(shí))。

3、 每扎加入1Oul CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體枳為200ul，刻需加入2Oul CCK-8溶液，以此類(lèi)推。可以用加相應(yīng)量的細(xì)胞培養(yǎng)基和CCK-8但不加細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照,若擔(dān) 心所使用的藥物會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)置加相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液，但不加細(xì)胞的孔作為空口對(duì)照。

4、 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時(shí)，具體時(shí)間而以通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定.預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在 0.5、 1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

5、 用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光值，若無(wú)450nm濾光片.可以使用420-480nm的 濾光片。如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液，可以使用大于600nm的波長(zhǎng)，例如650nm，作 為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。

6、 如果浴要哲時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入lOul0.1M HCL溶液或者1% W/V的 SDS溶液，避光保存在室溫，24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：
細(xì)胞活力=[0D（加藥）-0D（空白）]/ [OD（0加藥）-0D（空白）]x 
抑制率=[OD（0加藥）-OD（加藥）]/ [OD（0加藥）-OD（空白）]x
 OD（加藥）：具有細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光值
 OD（空白）：具有培養(yǎng)基、CCK-8溶液，沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光值
OD（0加藥）：具有細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8溶液，沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光值
注意事項(xiàng)：
1、使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，請(qǐng)注意蒸發(fā)問(wèn)題。可將96孔板外圍一圈加培養(yǎng)基、水或PBS保濕。同時(shí)，可以把96孔板置于培養(yǎng)箱內(nèi)靠近水盤(pán)的位置以緩解蒸發(fā)。
2、培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而不同。在正式實(shí)驗(yàn)前，建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索鋪板的細(xì)胞數(shù)量以及加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
3、鋪板時(shí)請(qǐng)注意保證每個(gè)孔細(xì)胞數(shù)量均勻，建議鋪板過(guò)程中注意時(shí)常混勻，防止因細(xì)胞沉淀造成不均勻。加入CCK-8后請(qǐng)前后左右輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板數(shù)次，使培養(yǎng)基和CCK-8溶液充分混勻。
4、本試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。若藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
5、加入CCK-8時(shí)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色或pH值已變化，建議換用新鮮的培養(yǎng)基。
6、用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。
7、本試劑盒系無(wú)菌灌裝生產(chǎn)。在使用過(guò)程中，請(qǐng)?jiān)谏锇踩駜?nèi)無(wú)菌操作，避免污染。
8、為了您的健康和安全，請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套或乳膠手套操作。
保存方法：
0-5℃避光保存，保存建議-20℃，但不能反復(fù)凍融。
0-5℃條件下可保存一年。