兩棲類骨髓細(xì)胞染色體制作方法實驗

時間：2016/10/31閱讀：1114

一、實驗?zāi)康牧私夂驼莆談游锶旧w涂片標(biāo)本的制作過程，為今后開展有關(guān)這方面的科研打下基礎(chǔ)。二、實驗原理請參閱實驗十《小白鼠染色體的制備與觀察》三、實驗材料青蛙或蟾蜍四、實驗器具和藥品試劑冰箱、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、顯微鏡、分析天平、藥物天平、臺稱、試管架、離心管、吸管、燒杯、量筒、注射器(1ml、5ml)、5號針頭、載玻片、解剖盤、解剖刀、剪刀、鑷子、酒精燈、切片盒、切片架、紗布、黑白膠卷。0.1％秋水仙素溶液、0.046M KCL 溶液、1％檸檬酸鈉溶液、甲醇、冰醋酸、磷酸緩沖液、Giemsa原液、沖洗底片的藥液。五、實驗方法和步驟(一) 前處理用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重，然后按10微克／克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。(二) 取材注射4小時后，將動物處死，用剪刀剪開皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，剔凈股骨上的肌肉，然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨，用注射器（內(nèi)裝5ml 1％檸檬酸鈉溶液）緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中，經(jīng)平衡后離心8分鐘，速度為1000轉(zhuǎn)／分鐘。(三) 低滲吸去上清液，留沉淀物0.2ml，加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度，用吸管沖勻沉淀物，在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。(四) 固定低滲后，以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1～2次，離心的速度與時間以上述相同。(五) 滴片吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加4滴新配的固定液，沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片，每片滴3滴細(xì)胞懸液，立即用嘴向載片上吹氣，使細(xì)胞均勻分散，在酒精燈火焰上來回烤一下，以助染色體更好分散和展開。(六) 染色用10：1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH＝6.8磷酸緩沖液稀釋)，然后用水沖洗，片干后鏡檢。(七) 鏡檢在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相，轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目，屬于大、中、小染色體各有多少條。

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