反轉(zhuǎn)錄差異顯示技術(shù)（DDRT

摘 要: 運(yùn)用mRNA反轉(zhuǎn)錄差異顯示技術(shù)可以了解不同細(xì)胞或同類(lèi)細(xì)胞在不同發(fā)育階段、不同生理狀態(tài)下的基因表達(dá)狀況，為研究生命活動(dòng)過(guò)程提供重要信息。文章對(duì)差異顯示反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)的基本原理,優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn),以及近年來(lái)對(duì)該技術(shù)涉及的RT-PCR方法、引物設(shè)計(jì)、PCR反應(yīng)參數(shù)、電泳及差異條帶的顯示方法以及雜交方式進(jìn)行了論述和評(píng)價(jià)，并對(duì)其應(yīng)用前景進(jìn)行了簡(jiǎn)單分析。

關(guān)鍵詞：反轉(zhuǎn)錄差異顯示PCR;反向northern印跡;銀染 

基因的差異性表達(dá)不僅是細(xì)胞形態(tài)和功能多樣性的根本原因，而且也是各種生理及病變過(guò)程的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此，分離、鑒定差異表達(dá)的基因具有重要的意義。真核生物基因組中，僅約10％～15％的基因在細(xì)胞中表達(dá)，而且不同發(fā)育階段、不同生理狀態(tài)和不同類(lèi)型的細(xì)胞中表達(dá)的基因也不盡相同。1992年美國(guó)哈佛醫(yī)學(xué)院的兩名科學(xué)家Liang P和Pardee A D 根據(jù)高等生物成熟的mRNA都帶有poly(A)的特性，用特定的錨定引物反轉(zhuǎn)錄后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，建立了mRNA差異顯示技術(shù)，由此可見(jiàn)其實(shí)用性和廣泛性。DDRT-PCR的優(yōu)點(diǎn)可概括為3SRV(simplicity,sensitivity,speed,reproducibility,versatility)[3]：①簡(jiǎn)單，技術(shù)上僅僅依靠PCR和DNA測(cè)序膠電泳；②可以同時(shí)分析多組樣品；③靈敏性高，僅需0.2 μg總RNA作為起始材料，可檢出低豐度mRNA；④實(shí)驗(yàn)周期短，約8 d即可完成，便于重復(fù)；⑤zui突出的優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可步步驗(yàn)證比較；⑥可進(jìn)行多基因家族的表達(dá)分析。