載體及目的DNA 片斷經(jīng)酶切后，如果無(wú)多余的片斷（如載體單切）可以直接酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收直接連接用。但多數(shù)還有多余片斷（如載體雙酶切后有插入片斷但要回收空載體，多個(gè)目的DNA片斷選擇其一克隆），必須電泳分離后回收目的片斷。回收的方法既有傳統(tǒng)的方法，這些方法基于降低凝膠的熔點(diǎn)以釋放DNA，然后通過(guò)酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收，也有公司生產(chǎn)的商品化的試劑盒可用，這些試劑盒多采用凝膠裂解液（如含有降低熔點(diǎn)的NaI）融化凝膠釋放DNA后，采用特殊的硅膠樹(shù)脂吸附DNA后，用洗液洗去雜質(zhì)，zui后用洗脫液洗出DNA。
一．材料、試劑和儀器：
1 材料：待回收DNA樣品
2試劑：
1) 1% 低熔點(diǎn)膠，瓊脂糖，
2) glassmilk kit: 裂解緩沖液，漂洗液，glassmilk
3) TE, ddH2O,
4) 酚/ 氯仿, 氯仿, 無(wú)水乙醇，70％乙醇，
5) DNA回收試劑盒: 樹(shù)脂， 80％異丙醇，Syringe Barrel,
3儀器： 離心機(jī) ， 水浴鍋， 電泳儀
二 實(shí)驗(yàn)程序：
2.2.1 低熔點(diǎn)膠法：
1) 電泳到適當(dāng)位置后在目的DNA條帶的前端挖一長(zhǎng)方形槽，向槽中加入融化的低熔
點(diǎn)膠，待凝固后進(jìn)行電泳。當(dāng)DNA進(jìn)入低熔點(diǎn)膠中心時(shí)停止電泳。紫外燈下切下目的條帶的低熔點(diǎn)膠。
2) 將切下的膠放到離心管中，加入200ul的TE，65℃溫浴3min以融化低熔點(diǎn)膠。
3) 分別用酚/氯仿，氯仿抽提一次。
4) 取上清，加入2倍體積的無(wú)水乙醇，-20℃沉淀DNA 2hr以上，12 000rpm離心15min，棄上清，用70%乙醇洗滌，吹干后溶于10ul無(wú)菌水中，取1ul電泳檢測(cè)。
2.2.2. 凍融法:
1) 電泳后直接切下凝膠中目的條帶后加200ul TE，再加2倍體積酚，在液氮中
凍2min ，再65℃水浴中融化10min，這樣重復(fù)數(shù)次.
2) 10 000g離心5 min，取上相液加2倍體積冰乙醇-20℃沉淀過(guò)夜。
3) 離心回收DNA，70%乙醇洗一次后溶于適量的TE或無(wú)菌水中，電泳檢測(cè)回收
效果。
2.2.3 Glassmilk法:
2.2.4. 試劑盒法(Technical bulletin of Wizard PCR Preps DNA Purification system Promaga公司):
1) 電泳分離PCR產(chǎn)物。
2) 用干凈無(wú)菌的刀片切割目的DNA條帶，放入1.5mL Ep管中，積累凝膠至大約300ul。
3) 在裝有凝膠的離心管中加入1mL樹(shù)脂， 65℃水浴5min或直到凝膠*溶解。
4) 拔出注射器活塞備用，將 Syringe Barrel和Minicolumn 連接。
5) 將樹(shù)脂DNA混合液移入Syringe Barrel中，插入活塞緩慢將混合液推入
Minicolumn.
6) 分開(kāi)syringe Barrel和Minicolumn ,去掉活塞。重新連接Syrringe Barrel和
Minicolumn, 加入2mL 80％異丙醇到Syringe中以洗柱子。插入活塞，緩慢將
異丙醇推入Minicolumn。
7) 去掉Syringe，將Minicolumn移入1.5mL離心管中，10 000g（半徑5.5~6cm
13000rpm）離心2min以干燥樹(shù)脂。
8) 將Minicolumn放入一新的離心管中，加入50ul ddH2O或TE到Minicolumn中，
放置1min，10000g，離心20sec。
9) 去除Minicolumn，將純化的DNA貯存于4℃或-20℃。
二．結(jié)果分析：
DNA純化回收后, 電泳檢測(cè)應(yīng)為單一的條帶。如果切膠過(guò)程中不慎帶上雜帶, 那么回收后電泳結(jié)果可能會(huì)出現(xiàn)兩條以上的帶。這時(shí)可以進(jìn)行重復(fù)純化回收。
