有關細胞支原體污染的經驗討論

時間：2014/9/29閱讀：782

支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.3-0.5μm之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態。它不同于細胞，也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養中生長，營養要求比細菌高。

細胞培養（特別是傳代細胞）被支原體污染是個世界性問題。在細胞培養中支原體感染發生率達到63%，支原體感染發生后能改變細胞的DNA,RNA及蛋白表達，又不能通過可視法對其進行檢測，而且它對細胞的生長率影響較小，不易引起注意。國內外研究表明，95％以上是以下四種支原體：口腔支原體（M.orale）、支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和萊氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性。以上是zui常見的污染細胞培養的支原體菌群，但能夠污染細胞的支原體種類是很多的，國外調查證明，大約有二十多種支原體能污染細胞，有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。

支原體污染的來源包括工作環境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養基的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。

組織細胞培養工作中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環境污染；嚴格實驗操作；細胞培養基和器材要保證無菌；在細胞培養基中加入適量的抗生素。支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理。支原體zui突出的結構特征是沒有細胞壁，一般來講，對作用于細胞壁生物合成的抗生素，如 β-內酰胺類、等*不敏感；對多粘菌素（polymycin）、、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體zui有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環素類、大環內酯類及一些；其他類抗生素如氨基糖苷類、對支原體有較小抑制作用，所以常不用來作為支原體感染的化學治療劑。InvivoGen公司研究開發的新一代支原體抗生素M-Plasmocin能有效地殺滅支原體，不影響細胞本身的代謝，并且用M-Plasmocin處理過的培養細胞，不會重新感染支原體。

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