士鋒生物大規(guī)模培養(yǎng)常用方法

根據(jù)動物細胞的類型，可采用貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和固定化培養(yǎng)等三種培養(yǎng)方法進行大規(guī)模培養(yǎng)。 

一、動物細胞生長特性及培養(yǎng)溫度 

1.細胞生長緩慢，易污染，培養(yǎng)需用抗生素 
2.細胞大，無細胞壁，機械強度低，環(huán)境適應性差 
3.需氧少，不耐受強力通風與攪拌 
4.群體生應，貼壁生長（錨地依賴性） 
5.培養(yǎng)過程產(chǎn)品分布細胞內(nèi)外，成本高 
6.原代培養(yǎng)細胞一般繁殖50代即退化死亡 

依據(jù)在體外培養(yǎng)時對生長基質(zhì)依賴性差異，動物細胞可分為兩類： 

●貼壁依賴型細胞：需要附著于帶適量電荷的固體或半固體表面才能生長，大多數(shù)動物細胞，包括非淋巴組織細胞和許多異倍體細胞均屬于這一類。 

●非貼壁依賴型細胞：無需附著于固相表面即可生長，包括血液、淋巴組織細胞、許多腫瘤細胞及某些轉化細胞。 
培養(yǎng)細胞的zui適溫度相當于各種細胞或組織取材機體的正常溫度。人和哺乳動物細胞培養(yǎng)的zui適溫度為35~37℃。偏離這一溫度，細胞正常的代謝和生長將會受到影響，甚至死亡。總的來說，培養(yǎng)細胞對低溫的耐力比高溫高。溫度不超過39℃時，細胞代謝強度與溫度成正比；細胞培養(yǎng)置于39~40℃環(huán)境中1h，即受到一定損傷，但仍能恢復；當溫度達43℃以上時，許多細胞將死亡。當溫度下降到30~20℃時，細胞代謝降低，因而與培養(yǎng)基之間物質(zhì)交換減少。首先看到的是細胞形態(tài)學的改變以及細胞從基質(zhì)上脫落下來。當培養(yǎng)物恢復到初始的培養(yǎng)溫度時，它們原有的形態(tài)和代謝也隨之恢復到原有水平。 

二、貼壁培養(yǎng)（attachment culture）是指細胞貼附在一定的固相表面進行的培養(yǎng)。 

1.生長特性：貼壁依賴型細胞在培養(yǎng)時要貼附于培養(yǎng)（瓶）器皿壁上，細胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展，然后開始有絲分裂，并很快進入對數(shù)生。一般數(shù)天后就鋪滿培養(yǎng)表面，并形成致密的細胞單層。 

2.貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點： 
●容易更換培養(yǎng)液；細胞緊密黏附于固相表面，可直接傾去舊培養(yǎng)液，清洗后直接加入新培養(yǎng)液。 
●容易采用灌注培養(yǎng)，從而達到提高細胞密度的目的；因細胞固定表面，不需過濾系統(tǒng)。 
●當細胞貼壁于生長基質(zhì)時，很多細胞將更有效的表達一種產(chǎn)品。 
●同一設備可采用不同的培養(yǎng)液/細胞的比例。 
●適用于所有類型細胞。 

3.貼壁培養(yǎng)的缺點：與懸浮培養(yǎng)法相比 
●擴大培養(yǎng)比較困難，投資大； 
●占地面積大； 
●不能有效監(jiān)測細胞的生長；