士鋒生物法測(cè)定可溶性糖

植物體內(nèi)的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖。法測(cè)定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與縮合成一種橙紅色化合物，在10～100μg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm波長(zhǎng)下有zui大吸收峰，故可用比色法在此波長(zhǎng)下測(cè)定。法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測(cè)定，方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min以上。
【儀器與用具】
分光光度計(jì)；電爐；鋁鍋；20ml刻度試管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；記號(hào)筆；吸水紙適量。
【試劑】
1．90%溶液 稱取90g（AR），加蒸餾水10ml溶解，在室溫下可保存數(shù)月；
2．9%溶液 取3ml 90%溶液，加蒸餾水至30ml，現(xiàn)配現(xiàn)用；
3．濃硫酸（比重1.84）；
4．1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 將分析純蔗糖在80℃下烘至恒重，稱取1.000g。加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml濃硫酸，用蒸餾水定容至刻度；
5．100μg/ml蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 吸取1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。
【方法】
1．標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
取20ml刻度試管11支，從0～10分別編號(hào)，按表24-1加入溶液和水。
表24-1 各試管加溶液和水的量
管 號(hào)
0
1～2
3～4
5～6
7～8
9～10
100μg/ml蔗糖液(ml)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
水(ml)
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
蔗糖量(μg)
0
20
40
60
80
100
然后按順序向試管內(nèi)加入1ml 9%溶液，搖勻，再從管液正面快速加入5ml濃硫酸，搖勻。比色液總體積為8ml，在恒溫下放置30min，顯色。然后以空白為參比，在485nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定，以糖含量為橫坐標(biāo)，光密為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出標(biāo)準(zhǔn)直線方程。
2．可溶性糖的提取
取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取0.10～0.30g，共3份，或干材料。分別放入3支刻度試管中，加入5～10ml蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液過濾入25ml容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘?jiān)ㄈ葜量潭取?br />3．測(cè)定 吸取0.5ml樣品液于試管中（重復(fù)2次），加蒸餾水1.5ml，同制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟，按順序分別加入，濃硫酸溶液，顯色并測(cè)定光密度。由標(biāo)準(zhǔn)線性方程求出糖的量，按下式計(jì)算測(cè)試樣品中糖含量。
可溶性糖含量(mg/g)=