士鋒生物雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)介紹

原理 
常用于定性檢測(cè)，也可用于半定量檢測(cè)。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的小孔內(nèi)，讓它們相互向?qū)Ψ綌U(kuò)散。當(dāng)兩者在zui適當(dāng)比例處相遇時(shí)，即形成一條清晰的沉淀線。根據(jù)有否出現(xiàn)沉淀線，可用已知的抗體鑒定未知的抗原，或用已知的抗原鑒定未知的抗體。臨床常用本方法檢查原發(fā)性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作為原發(fā)性肝癌的早期輔助診斷。 
甲種胎兒蛋白（α-Fetal protein, AFP），是胎兒組織及體液中的正常組織成份。胎兒在第9周才出現(xiàn)此種蛋白，13~19周達(dá)高峰，到21周后逐漸下降，胎兒出生后該蛋白即行消失或含量甚微，普通試驗(yàn)方法檢查不出，而肝癌病人及個(gè)別卵巢癌或睪丸癌病人的血清檢出有此種蛋白。 

材料 
1．抗AFP血清、已知肝癌病人AFP陽(yáng)性血清、待檢病人血清。 
2．1.2%瓊脂（用生理鹽水配成）。 
3．載玻片、毛細(xì)吸管、濕盒。 

方法 
1．制備瓊脂玻片 將已知加熱溶化的1.2%瓊脂3.5ml，迅速傾入載玻片上。 
2．打孔 待凝固后用打孔器按下圖樣打孔。（孔徑3mm，孔距4mm）

3．加樣 
以上方孔為第1孔，按順時(shí)針方向分別稱為2、3、4、5和6孔，孔為7孔。7孔加入抗AFP血清，1、4孔加入已知AFP陽(yáng)性血清（或AFP），作為陽(yáng)性對(duì)照孔；6孔加入已知AFP陰性血清，作為陰性對(duì)照孔，其余2、3、5孔為試驗(yàn)孔，加入待檢血清。 
4．溫育 置濕盒室溫或37℃溫育12-24 h。 

結(jié)果觀察 
1、4孔與7孔間應(yīng)出現(xiàn)白色沉淀線（如上左圖1與7，4與7），6與7孔間應(yīng)不出現(xiàn)白色沉淀線。若2、3、5孔與7孔間出現(xiàn)白色沉淀線而且與陽(yáng)性對(duì)照沉淀線吻合者如圖中2、3、5與1、4孔間，即為實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，表明待檢血清中含有AFP（即AFP陽(yáng)性）。如出現(xiàn)與陽(yáng)性對(duì)照相連接，且呈槍刺狀如上右圖中4與5孔間，說(shuō)明二者間有共同抗原成分；如出現(xiàn)成交叉的沉淀線如上右圖3與4，則是非特異性沉淀反應(yīng)，為假陽(yáng)性反應(yīng)，乃判為實(shí)驗(yàn)陰性，表明待檢血清為AFP陰性。