士鋒圣物免疫細胞的分離和保存技術

時間：2013/12/24閱讀：704

概述
臨床上的各種類型的免疫缺陷、自身免疫病以及腫瘤等疾病均可出現(xiàn)淋巴細胞或淋巴亞群的數(shù)量和功能的變化。因此用體外方法對機體具有免疫反應的外周血淋巴細胞及其亞群的數(shù)目或比例以及它們所顯示的功能的強弱進行檢測，是判斷機體細胞免疫水平的一種重要手段。這對于臨床認識疾病、探討其發(fā)病機制、觀察病情變化、判斷預后、考核療效和防治疾病等方面均有重要意義。

*節(jié) 免疫細胞的分離
用體外方法對機體各種具有免疫反應的細胞分別作鑒定、計數(shù)和功能測定，是觀察機體免疫狀態(tài)的一種重要手段。為此，須將各種參與免疫反應的細胞從血液中分離出來。參與免疫的細胞主要包括：淋巴細胞、巨噬細胞、中性粒細胞等。

一、白細胞的分離
血液中紅細胞與白細胞比例約為600~1000：1，兩者的比重不同其沉降速度也不同，通常用兩種方法加以分離。
1、自然沉降法外周血，抗凝，靜置約一小時血液分為三層，上層為血漿，底層為紅細胞，緊貼紅細胞層上面的灰白層為WBC，輕輕吸取此層即可得到富含WBC懸液，低滲破壞RBC，洗滌即可。
2、聚合物加速沉淀法
常利用高分子量的聚合物如明膠、右旋糖酐等，將紅細胞快速沉降，從而分離出白細胞。本法的細胞獲得率比自然沉降法高。

二、外周血單個核細胞的分離
人血液中各種細胞的密度如下：
紅細胞：1.093
白細胞：1.092
淋巴細胞和單核細胞：1.075~1.090
血小板：1.030~1.035
單個核細胞包括：淋巴細胞和單核細胞。
分離血細胞常用的分離劑為：Ficoll和Percoll分離劑
1、 Ficoll分層液
主要用于分離外周血中的單個核細胞，是一種單次密度梯度離心分離法。其主要成分為聚蔗糖(商品名為Ficoll )其密度為1.020。可將血液分成四層，從上到下依次是：血漿、單個核細胞、粒細胞和紅細胞。

2、Percoll分層液
是一種連續(xù)密度梯度離心分離法，其主要成分為：硅膠顆粒，其原液密度為：1.135。可將血液分成四層，從上到下依次是：死亡細胞和血小板、單核細胞、淋巴細胞、粒細胞和紅細胞。

士鋒圣物免疫細胞的分離和保存技術

會員登錄

收藏該商鋪

提示