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        上海士鋒生物科技有限公司
        中級(jí)會(huì)員 | 第14年

        13127537090

        標(biāo)準(zhǔn)品
        培養(yǎng)基
        培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
        抗體
        生物試劑
        細(xì)胞
        菌株
        血清
        細(xì)胞分離試劑
        試劑盒

        酸性α免疫試驗(yàn)

        時(shí)間:2013/11/18閱讀:866
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        一、原理

        T淋巴細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有酯酶,可以水解α-醋酸萘酯,產(chǎn)生α-萘酚,α-萘酚又可與重氮付品紅偶聯(lián)生成不溶性的偶氮付品紅萘酚,在T淋巴細(xì)胞漿酯酶存在的部位生成不溶性的黑紅色的顆粒沉淀,而b淋巴細(xì)胞無(wú)此反應(yīng)。以資鑒別。

        二、材料與試劑

        1.固定液 40%甲醛
        2.分層液(聚蔗糖-) 比重1.077+0.001,配制見(jiàn)細(xì)胞分離技術(shù)一章。
        3.染色液
        (1)付品紅液:取2g付品紅加入2N HCl 100ml, 溫水浴溶解后保存于4℃?zhèn)溆谩?br />(2)溶液(現(xiàn)用現(xiàn)配):取0.14g加入雙蒸餾水10 ml,振蕩溶解。
        (3)α-醋酸萘酯溶液:取2gα-醋酸萘酯溶于乙二醇單甲醚100ml中,貯于棕色瓶?jī)?nèi),于4℃保存。
        (4)0.067 Mol/L pH7.6PB液
        甲液 KH2PO4 9.08溶于1 000ml雙蒸餾水
        乙液 KH2PO4 9.47g溶于1 000ml雙蒸餾水
        (6)甲基綠復(fù)染液:取1g甲基綠,溶于100ml雙餾水中,4℃保存。
        (7)應(yīng)用染色液(孵育液)的配制 取1ml溶液緩慢滴入1ml的付品紅液中,邊加邊搖勻,付品紅液由紅色變?yōu)闇\黃色,混合后,靜置1min~2min,將此混合液倒入30ml pH7.6PB液中,充分混合后,再加入α-醋酸萘酯溶液0.85ml,邊加邊攪拌,混勻后使用。

        三、操作方法

        1.標(biāo)本的制備 取肝素抗凝血1ml,加等量或適量的生理鹽水稀釋,取分層液2ml加入離心管內(nèi),然后將上述稀釋的血液沿管壁緩緩加入至分層液上,注意不要打破兩層界面。以水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)1 000~1 500r/min離心20min。結(jié)果形成四層,zui上面*層為血漿層,第二層為淋巴細(xì)胞(包括單核細(xì)胞)層,第三層為分層液,第四層為紅血球。用毛細(xì)管吸取血漿層,然后吸取淋巴細(xì)胞放入適量的Hank’s液(或生理鹽水)中,充分搖勻。2 000r/min離心5min~10min棄上清液,再重復(fù)洗滌一次,即獲淋巴細(xì)胞。以此淋巴細(xì)胞粥涂片。自然干燥后,以40%甲醛蒸汽固定10min。
        2.染色鏡檢
        (1)于固定的標(biāo)本片上滴加孵育液,以覆蓋為度,37℃染45min~60min,蒸餾水沖洗。
        (2)甲基氯復(fù)染1min~5min,蒸餾水沖洗。
        (3)自然干燥,鏡檢。

        四、結(jié)果判定

        在胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不一、數(shù)量不等的黑紅色顆粒的細(xì)胞為T淋巴細(xì)胞,無(wú)此顆粒的為B淋巴細(xì)胞。同時(shí)計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞100~200個(gè)。求出它們各占的百分比。
        幾種動(dòng)物的T淋巴細(xì)胞正常值
        馬 57.8+2.009%
        騾 51.8+2.037%
        小白鼠 76.42+4.44%
        豚鼠 73.43+8.04%
        兔 77.0+2.79%
        人 62.3+8.62%

         

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