士鋒生物微生物培養需要實驗步驟和注意事項

微生物基礎培養基是人工配制的用于培養微生物的一個混合營養制品，基礎培養基中含有維持微生物正常生長的營養物質，此培養基的PH值一般為7.2-7.6。某些特殊的微生物需要的PH可能偏酸或偏堿性。

培養基是根據微生物生長繁殖時對營養物質的需要而配制的營養制品，含有營養物質及適宜的酸堿度，經滅菌后使用。

常用的培養基按用途分為：基礎培養基、營養培養基、鑒別培養基、選擇培養基及厭氧培養基。按物理性狀分為固體、半固體和液體三種。

實驗目的：

了解常用的液體、固體、半固體培養基的成分、制備方法和用途。

實驗材料：

牛肉、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、0.1mol/lNaOH溶液、酚紅指示劑、蒸餾水等。

實驗方法：

一、肉湯培養基

1、 將鮮牛肉除去筋膜和脂肪，切成小塊后用絞肉機絞碎，以每500g碎牛肉加1000ml蒸餾水的比例混合后，置4℃冰箱過夜。

2、 次日取出浸泡物倒入容器內煮沸半小時，使肉渣凝固，也可煮沸一小時不經冰箱過夜。

3、 用紗布和脫脂棉過濾，除去肉渣，即成肉浸汁。加入1%蛋白胨及0.5%氯化鈉，加熱溶解并用蒸餾水補足蒸發失去的水分。

4、待冷至50℃左右時，調該溶液的pH至7.4~7.6。校正pH的方法為：①取三支與標準比色管（pH7.6）相同的空比色管，其中一管內盛放蒸餾水5ml;另外兩管各加入欲測的肉湯培養基5ml，其中一管內加0.02%酚紅指示劑0.25ml（滴定管），搖勻。②按圖2所示排列，舉起比色架，對光觀察。若滴定管色調較淡或為黃色，即表示培養基偏酸性，需滴加0.1mol/L

NaOH矯正;若呈深紅色，即表示偏堿性，應滴加0.1mol/L

HCl矯正;使之與標準比色管色澤相同為止。通常未矯正前的肉湯均呈酸性。記下用去的NaOH（或HCl）溶液量，由此計算出矯正全量培養基時所需NaOH（或HCl）溶液量。

1、 酸堿度矯正后，加熱煮沸10分鐘，用濾紙過濾，補足水分，再調一次pH值。

2、 分裝肉湯于三角燒瓶或試管，瓶口、管口加棉塞并用紙包扎。

3、 置高壓滅菌器內103.43Kpa20分鐘滅菌備用。

可用市售的牛肉膏代替牛肉，用量為0.3%，其余成分相同（如蛋白胨、氯化鈉等）加熱溶解，調節pH至7.6左右，煮沸10分鐘，補充失水、過濾、分裝，滅菌后備用。

二、固體培養基

1、在上述制備的肉湯中加入2-3%的瓊脂。瓊脂為海藻中提取的一種多糖類物質，本身無營養作用，不能被細菌利用。因其加熱到100℃后可溶化，冷卻至40℃左右又可凝固，故可作為賦形劑。加熱溶化，脫脂棉過濾，補足失水，分裝三角燒瓶和試管。

2、置高壓滅菌器內103.43Kpa滅菌20分鐘，取出后趁熱將試管傾斜一定角度放置，待瓊脂凝固即成瓊脂斜面培養基（圖3）。三角燒瓶內培養基冷至50-60℃時在超凈臺或無菌室內將其傾注于滅菌平皿內（15-20ml），凝固后即成瓊脂平板。

圖： 瓊脂斜面培養基

另外，實際工作中現多使用合成營養瓊脂干燥粉末制劑。其方法為：稱取41克營養瓊脂干燥粉末加入1000ml冷蒸餾水中混合放置10分鐘，隔石棉鐵絲網微火煮沸使其*溶解，分裝于中試管中（約5~7ml）或三角燒瓶，103.43kPa（121℃）滅菌15分鐘，即可備用。

三、半固體培養基

1、操作方法同固體培養基，但瓊脂加入量較少，僅0.3-0.5%。

2、分裝試管，滅菌后使試管直立，冷凝后即成半固體培養基

在基礎培養基中加入少量瓊脂即為半固體培養基，加入高濃度的瓊脂就成為固體培養基，因此可以說基礎培養基是配置特殊培養基的基礎，配置任何培養基它的成分里都一定會含有基礎培養基的。常見的微生物基礎培養基有營養肉湯、蛋白凍水等等。