士鋒生物實驗室如何測定維生素C的定量

一、原理：維生素C具有化學(xué)還原性。2，6-二氯酚靛酚鈉鹽水溶液呈藍(lán)色，在酸性環(huán)境中為玫瑰色，當(dāng)其被還原時，則脫色。根據(jù)其各自性質(zhì)，利用2，6，-二氯酚靛酚在酸性環(huán)境中滴定有維生素C的樣品溶液。開始時，樣品液中的維生素C立即將滴入的2，6-二氯酚靛酚還原脫色，當(dāng)樣品液中維生素全部被氧化時，再滴入2，6-二氯酚靛酚就不再被還原脫色而呈玫瑰色。故當(dāng)樣品液用2，6-二氯酚靛酚標(biāo)準(zhǔn)液滴定時，溶液出現(xiàn)淺玫瑰色時表明樣品液中的維生素C全部被氧化，達(dá)到滴定終點。此時，記錄滴定所消耗的2，6-二氯酚靛酚標(biāo)準(zhǔn)量，按下述計算出樣品中還原型維生素C的含量。

二、材料與試劑

綠豆芽、10%鹽酸溶液

2，6-二氯酚靛酚溶液：稱取0.21g，0.26g2，6-二氯酚靛酚溶于250ml蒸餾水中，稀釋至1000ml。過濾，裝入棕色瓶內(nèi)，置于冰箱中保存，不得超過3天。使用前用新配制的標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液標(biāo)定。取5ml標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸加入5ml偏磷酸-醋酸溶液。然后用2，6-二氯酚靛酚溶液的濃度，以每ml2,6-二氯酚靛酚溶液的濃度，以每毫升2，6-二氯酚靛酚溶液相當(dāng)于抗壞血酸的mg數(shù)來表示。

標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液：準(zhǔn)確稱取純抗壞血酸結(jié)晶50mg溶于偏磷酸-醋酸溶液定容到250ml。裝入棕色瓶中，儲于冰箱內(nèi)。

偏磷酸-醋酸溶液：稱取偏磷酸15g，溶于40ml冰醋酸和450ml蒸餾水所配的混合液中。過濾。儲于冰箱內(nèi)，此液保存不得超過10天。

三、操作方法

1、制備含維生素C的樣品提取液：稱取30g綠豆芽置于研缽中研磨，放置片刻（約10分鐘），用2層紗布過濾，將濾液（如混濁可離心）濾入50ml容量瓶中。反復(fù)抽提2-3次，將濾液并入同一容量瓶中。zui后，用酸化的蒸餾水（每10ml蒸餾水加10%鹽酸1滴）定容，混勻，備用。

2、維生素C含量的測定：量取樣品提取液10ml于錐形瓶中。用微量滴定管，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定樣品提取液，呈微弱的玫瑰色，持續(xù)5秒鐘不褪為終點，記錄所用2，6-二氯酚靛酚的ml數(shù)。整個滴定過程不要超過2分鐘。另取10ml用10%鹽酸酸化的蒸餾水做空白對照滴定。樣品提取液和空白各做三份。

3、計算結(jié)果

維生素Cmg/100g樣品=（（VA-VB）×S）/W×100

VA為滴定樣品提取液所用的2，6-二氯酚靛酚的平均ml數(shù)

VB為滴定空白對照所用的2，6-二氯酚靛酚的平均ml數(shù)

S為1ml2，6-二氯酚靛酚溶液相當(dāng)于維生素C的mg數(shù)

W為10ml樣品提取液中含樣品的g數(shù)