士鋒生物：五種分子生物學(xué)常用貯存液的配制方法

1、30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】將29g丙烯酰胺和1g N,N'-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之，補(bǔ)加水至終體積為100ml.用濾器（0.45μm孔徑）過(guò)濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0,置棕色瓶中保存于室溫。

【注意】丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過(guò)皮膚吸收，其作用具累積性。稱(chēng)量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具。可認(rèn)為聚丙烯酰胺無(wú)毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)樗€可能會(huì)含有少量未聚合材料。

一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹(shù)脂（MB-1Mallinckrodt），攪拌過(guò)夜，然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾以純化之。

在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會(huì)緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。

2、40%丙烯酰胺

【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA測(cè)序級(jí)）和20g N,N'-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補(bǔ)足至終體積為1L.

【注意】見(jiàn)上述配制30%丙烯酰胺的說(shuō)明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測(cè)定。

3、放線菌素D溶液

【配制方法】把20mg放線菌素D溶解于4ml 乙醇中，1:10稀釋貯存液，用乙醇作空白對(duì)照讀取OD440值。放線菌素D（分子量為1255）純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21,900，故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182,放線菌素D的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中，保存于-20℃。

【注意】放線菌素D是致畸劑和致癌劑，配制該溶液時(shí)必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，而不能在開(kāi)放在實(shí)驗(yàn)桌面上進(jìn)行，謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。

藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過(guò)測(cè)量貯存液在440nm波長(zhǎng)處的光吸收確定放線菌素D的濃度，這類(lèi)制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。

4、0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液

【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0,用蒸餾水定容1ml,分裝成小份保存于-70℃

5、10mol/L乙酸酰溶液

【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后過(guò)濾除菌。