熒光素標記甲狀腺核轉錄因子-1/甲狀腺特異增強子結合蛋白抗體IgG

1．動物的選擇 　純種BALB/C小鼠，較溫順，離窩的活動范圍小，體弱，食量及排污較小，一般環境潔凈的實驗室均能飼養成活。目前開展雜交瘤技術的實驗室多選用純種BALA/C小鼠。

　　2．免疫方案 　　選擇合適的免疫方案對于細胞融合雜交的成功，獲得高質量的McAb至關重要。一般在融合前兩個月左右根據確立免疫方案開始初次免疫，免疫方案應根據抗原的特性不同而定。

　　（1）可溶性抗原免疫原性較弱，一般要加佐劑，半抗原應先制備免疫原，再加佐劑。常用佐劑：福氏*佐劑、福氏不*佐劑。

　　初次免疫 抗原1～50μg加福氏*佐劑皮下多點注射或脾內注射（一般0.8～1ml,0.2ml/點）

　　↓3周后

　　第二次免疫 劑量同上，加福氏不*佐劑皮下或ip（腹腔內注射）（ip劑量不宜超過0.5ml）

　　↓3周后

　　第三次免疫 劑量同一，不加佐劑，ip（5～7天后采血測其效價）

　　↓2～3周

　　加強免疫，劑量50～500μg為宜，ip或iv（靜脈內注射）

　　↓3天后

　　取脾融合

　　目前，用于可溶性抗原（特別是一些弱抗原）的免疫方案也不斷有所更新，如：①將可溶性抗原顆粒化或固相化，一方面增強了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改變抗原注入的途徑，基礎免疫可直接采用脾內注射。③使用細胞因子作為佐劑，提高機體的免疫應答水平，增強免疫細胞對抗原的反應性。

　　（2）顆?？乖庖咝詮?，不加佐劑就可獲得很好的免疫效果。以細胞性抗原為例，免疫時要求抗原量為1～2×107個細胞。

　　初次免疫 1×107/0.5ml ip

　　↓2～3周后

　　第二次免疫 1×107/0.5ml ip

　　↓3周后

　　加強免疫（融合前三天）1×107/0.5ml ip或iv