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        ELISA試劑盒免疫測定的技巧

        閱讀:283發布時間:2017-9-19

        ELISA試劑盒免疫測定的技巧

        在ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚,即加標本,加酶物,加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并注意不行濺起,不行發作氣泡。
        加標本通常用微量加樣器,按規則的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以免發作穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其間參加血清標本,然后在微型震動器上震動1分鐘以確保混和。加酶物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器,使加液進程敏捷完結。在ELISA檢查試劑盒中通常有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶物后。抗原抗體反響的完結需求有必定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。
        ELISA試劑盒屬固相,抗原、抗體的只在固相表面上發作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗的時機,只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐漸平衡的進程,因而需經分散
        才干到達反響的結尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的也相同如此。這即是為何ELISA反響老是需求必定時刻的溫育。
        ELISA試劑盒溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體的合適溫度。在樹立ELISA辦法作反響動力學研討時,實驗表明,兩次抗原抗體反響通常在37℃經1-2小時,ELISA檢查試劑盒產品的生成可達高峰。為加快反響,可進步反響的溫度,有些實驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中,以形成zui多的沉積。但因所需時刻太長,在ELISA中通常不予選用。


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