柱式植物RNAout2.0
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是天澤基因柱式植物RNAOUT（CAT#:71203）與柱式DNA清除劑（CAT#:90318）整合后得到的升級(jí)產(chǎn)品，它解決了提取的植物總RNA中出現(xiàn)基因組DNA污染這一難題，提取的RNA通過(guò)PCR驗(yàn)證不含基因組DNA污染。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：
1. 操作簡(jiǎn)單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十幾分鐘。
2. RNA純度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
3. 所提取RNA不含基因組DNA污染（電泳及PCR均檢測(cè)不到）。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。
5. 性?xún)r(jià)比高于進(jìn)口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。
規(guī)格及成分 成 份 50次大紙盒包裝
溶液A 50 mL
溶液B 15 mL
溶液C 50 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 100 mL
膜反應(yīng)液 2.5 mL
RNase-free DNase（1U/uL） 0.5 mL
RNA洗脫液 10 mL
使用手冊(cè) 1份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸，4℃保存（DNase 需要-20℃保存），有效期一年
自備試劑 氯仿
使用方法 1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要100-200 mg植物葉片、或50-100 mg植物種子、或200-500 mg植物果實(shí)。
2. 先將新鮮植物*切成小塊（保存在RNALOCKER中的植物組織需用紙吸去RNALOCKER液體后再剪切成小塊），放入10-15 mL塑料離心管中，加入1 mL 65℃預(yù)熱的溶液A（用前需要搖晃混勻），然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮研磨法破碎植物組織，研磨完后加入1 mL溶液A，但效果比較差，因?yàn)檠欣彵举|(zhì)是二氧化硅，在溶液A存在時(shí)會(huì)吸附RNA。
3. 將勻漿物或研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5 mL塑料離心管中（可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片）。有的植物組織（比如果實(shí)）含有大量水份，勻漿液會(huì)多于1 mL，轉(zhuǎn)移時(shí)也只取1 mL。
4. 在離心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自備氯仿，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來(lái)。
5. 室溫12000 rpm離心3-5分鐘，兩相間將有約5毫米厚的細(xì)胞破碎物。
6. 將上清液（約0.6 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5 mL塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。留下100 uL上清液不取。
7. 加入跟上清液等體積的溶液C，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生（對(duì)某些植物，屬于正常現(xiàn)象），千萬(wàn)不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 將一半的混合液（含沉淀物，如果有的話）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000 rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 將剩下的一半的混合液（含沉淀物，如果有的話）轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，12000 rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加0.7 mL通用洗柱液，12000 rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液，12000 rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但對(duì)于在第7步加入溶液C后有沉淀產(chǎn)生的樣品，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3 mL，其他操作不變。
11. 12000 rpm室溫離心10秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)抑制后續(xù)反應(yīng)中DNase的活性。
12. 將10 uL（10 U）的RNase-free DNase加入到50 uL 37℃預(yù)熱的DNA膜反應(yīng)液中，吹打混勻配制成DNase工作液。
13. 將DNase工作液在37℃預(yù)熱1分鐘，然后全部加入到離心吸附柱中，室溫放置5分鐘。注意：5分鐘一般足夠降解大多數(shù)情況下的DNA污染。如果DNA沒(méi)有*降解（可能由于樣品中殘留的雜質(zhì)抑制了DNase的活性），此步的保溫時(shí)間可以適當(dāng)延長(zhǎng)到10分鐘或15分鐘。
14. 直接在離心吸附柱中加0.7 mL通用洗柱液，蓋上蓋后顛倒數(shù)次混勻。
15. 12000 rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
16. 再加0.3 mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12000 rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
17. 12000 rpm室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇（通用洗柱液中的成分）會(huì)影響RNA的使用。
18. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中，加入30-50 uL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
19. 12000 rpm室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品。本產(chǎn)品提供的離心吸附柱吸附力較強(qiáng)，一次洗脫不能全部將膜上RNA洗下，如有必要，可以再加入30-50 uL RNA洗脫液一次。
20. 所得RNA溶液可以立即使用或存放于-80℃待用。如果要進(jìn)行甲醛變性電泳檢測(cè)。如果使用非變性膠電泳，則必須使用RNAon上樣液。千萬(wàn)不能使用DNA上樣液（因?yàn)樗话銢](méi)經(jīng)過(guò)去RNase處理）。
