大鼠elisa檢測試劑盒比色測定抗體含量的方法

目前常用的幾種大鼠elisa檢測試劑盒方法有：測定抗體的間接法，測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內，加待測抗體，保溫后洗滌以除去未結合的雜蛋白質，加酶標抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應，用目測或光電。
三、操作步驟
①抗原包被：兔抗人IgG ELISA試劑盒作為抗原，用包被液l：8000稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應板中。4℃放置過夜。
②洗滌：次日傾去凹孔內的液體，洗滌液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h.
④洗滌：用洗滌液洗3次。
⑤加待測樣品(一抗)：將含單克降抗體的細胞培養上清在另-塊板上用PBS 連續稀釋(按照1：2或1：10)，100μL /孔加到 已包被的板上，每個樣品平行做兩份，PBS 或空白培養基作為陰性對照，已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗滌：用洗滌液洗3次。
⑦加酶標抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋，100μL／孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗滌：用洗滌液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮配制的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍色。
⑩大鼠elisa檢測試劑盒終止反應、比色：加50μL/孔終止液。ELISA試劑盒顏色變黃；用酶標儀測定450nm 處各孔的吸光值，陽性反應的zui大稀釋度為待測 樣品的效價。
    A.C.E. 測序緩沖液  (1X  帶顏色)    100ML    測序級    A.C.E. BUFFER 1X, TINTED
    A.C.E. 測序緩沖液  (1X  帶顏色)    1L    測序級    A.C.E. BUFFER 1X, TINTED
    A.C.E. 測序緩沖液  (10X)    100ML    測序級    A.C.E. SEQUENCING BUFFER, 10X CONC.
    A.C.E. 測序緩沖液  (10X)    1L    測序級    A.C.E. SEQUENCING BUFFER, 10X CONC.
    A.C.E. 測序緩沖液  (10X)    5L    測序級    A.C.E. SEQUENCING BUFFER, 10X CONC.
    A.C.E. 測序緩沖液  (10X  帶顏色)    100ML    測序級    A.C.E. BUFFER 10X, TINTED
    A.C.E. 測序緩沖液  (10X  帶顏色)    1L    測序級    A.C.E. BUFFER 10X, TINTED
    A.C.E. 測序緩沖液  (10X  帶顏色)    500ML    測序級    A.C.E. BUFFER 10X, TINTED
大鼠elisa檢測試劑盒