藍染細胞的試驗

時間：2015/11/13閱讀：657

某些染料如臺盼藍可使死細胞染上藍色，而活細胞拒染。腫瘤細胞經(jīng)不同抗癌藥物作用后，用臺盼藍染色，于光學顯微鏡下計數(shù)藍染細胞，即可求出不同藥物的細胞毒作用。

1．材料

(1)待檢藥物：視情況選擇lO種左右。按已知臨床藥物血漿峰值濃度(PPC)，用生理鹽水配成3個稀釋度(O．1 PPC、1 PPC、lO PPC)。

(2)細胞：手術(shù)切除或*取新鮮腫瘤組織制成單細胞懸液。

(3)試劑：1％臺盼藍染液、RPMI 1640培養(yǎng)液(含15％CS、l％HEPES、*100U／ml和*100μg／ml)、1％*或膠原酶、Hanks液。

(4)器材：24孔培養(yǎng)板、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、計數(shù)器。

2．方法

(1)取新鮮腫瘤組織，置含雙抗的RPMI 1640培養(yǎng)液中送檢(4℃，3～4h)。迅速移又含5％CS的Hanks液中洗滌2次，去除其表面的凝血塊及壞死組織等。然后移至無菌平皿內(nèi)，用眼科剪將腫瘤*成肉泥狀，加入RPMI 1640*培養(yǎng)液，經(jīng)200目不銹鋼罔疊磨過濾，收集單個細胞懸液(如腫瘤組織較硬，則需用*或膠原酶消化后，再用全培養(yǎng)液制成細胞懸液)。

(2)取少許細胞懸液經(jīng)臺盼藍染色鏡檢，證實細胞活性在95％以上，調(diào)整細胞濃度為l×lO5／ml備用。于24孔培養(yǎng)板內(nèi)滴加0．9ml／孔的細胞懸液，再于孔內(nèi)滴加不同濃度的各種抗癌藥物(O．1ml／孔)，每個濃度設3個孔，同時設對照孔(加生理鹽水O．1ml／孔)，輕輕搖勻，置37℃、5％CO2孵箱中培養(yǎng)24～zt8h。

(3)每孔加1％臺盼藍2滴，充分吹吸混勻，滴于載玻片上加蓋玻片后立即于高倍鏡下計數(shù)100～200個腫瘤細胞中死亡(即藍染)的細胞數(shù)。按下列公式計算細胞毒。以細胞毒大于或等于70％為敏感，大于或等于50％為有效。

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