T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗的基本原理

T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗的基本原理

    T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時,受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后,可出現(xiàn)細(xì)胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平,因此可作為測定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一.

    淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗有形態(tài)計數(shù)法、MTT 法和同位素法三種.MTT 法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法.MTT 是一種噻唑鹽,化學(xué)名3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液為黃橙色.小鼠脾細(xì)胞受到ConA 作用后發(fā)生增殖活化,其胞內(nèi)線粒體琥珀酸脫氫酶活性相應(yīng)升高,MTT 作為其底物參與反應(yīng),形成藍(lán)色的甲臜（Formazan）顆粒沉積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周圍,經(jīng)鹽酸─異丙醇溶解后為藍(lán)色溶液,可用酶標(biāo)測定儀測定細(xì)胞培養(yǎng)物的OD 值,測定波長570nm.根據(jù)OD 值的大小計算反應(yīng)體系中細(xì)胞增殖程度.

    3H-TdR 摻入法：細(xì)胞增殖的基本條件或前提為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的復(fù)制,這是正常細(xì)胞增殖過程缺一不可的前提.一般來說,一個細(xì)胞周期可大致分為四期,即G1 期、S期、G2 期和M期.其中S期為DNA合成期,主要功能活動為DNA合成.3H-TdR即（甲基-3H）胸腺嘧啶核苷（[3H-methyl]thymidine）,是DNA合成的前體.加入細(xì)胞培養(yǎng)液中后被細(xì)胞攝取作為DNA合成的原料.細(xì)胞合成的DNA越多,則所摻入的3H-TdR就越多,因此,檢測所摻入的3H-TdR就可反映細(xì)胞增殖的程度.因該方法有同位素污染問題,故我們實習(xí)中仍用MTT法.