微生物實驗室生物安全操作規(guī)程（1）

制訂本規(guī)則，保證實驗室工作人員的健康安全、實驗設(shè)備安全衛(wèi)生以及防止對外界環(huán)境造成污染。
二、適用范圍
   適用于微生物實驗室人員人身安全、衛(wèi)生健康安全管理及設(shè)備安全。
三、職責(zé)
   實驗室工作人員必需嚴格遵守安全操作規(guī)程。
四、安全操作規(guī)程：
1.員工安全操作規(guī)程
1.1 實驗室入口處須貼上生物危險標(biāo)志，注明危險因子、生物安全級別、負責(zé)人姓名和、進入實驗室的特殊要求及離開實驗室的程序。
1.2 禁止非工作人員進入實驗室。參觀實驗室等特殊情況須經(jīng)實驗室負責(zé)人批準(zhǔn)后方可進入，做好衛(wèi)生防護，并在有關(guān)人員陪同下方可進入，同時注意做好環(huán)境維護及保密工作。
1.3 進行感染性實驗時，禁止他人進入實驗室，或必須經(jīng)實驗室負責(zé)人同意后方可進入。免疫耐受或正在使用免疫抑制劑的工作人員必須經(jīng)實驗室負責(zé)人同意方可在實驗室工作。
1.4 接觸微生物或含有微生物的物品后，脫掉手套后和離開實驗室前要洗手。
1.5 禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食物。
1.6 盡量以移液器吸取液體，禁止口吸。
1.7 實驗過程中，嚴格按有關(guān)操作規(guī)程操作，降低濺出和氣溶膠的產(chǎn)生。
1.8 每天至少消毒一次工作臺面，活性物質(zhì)濺出后要隨時用75%乙醇或巴氏消毒液消毒。
1.9 工作人員應(yīng)接受必要的免疫接種和檢測(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。工作人員要接受有關(guān)的潛在危險知識的培訓(xùn)，掌握預(yù)防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次的培訓(xùn)。人員暴露于感染性物質(zhì)時，及時向?qū)嶒炇邑撠?zé)人匯報，并記錄事故經(jīng)過和處理方案。
1.10禁止將無關(guān)動物帶入實驗室。
2.無菌室安全操作規(guī)程
2.1無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面一次(拖布)，紫外線照射消毒30min以上，超凈工作臺臺面每次實驗前要用75％酒精擦洗。然后紫外線消毒30min。操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內(nèi)同時紫外線消毒。
2.2無菌室應(yīng)保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。 　　
2.3無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如5％的甲酚溶液，75％的酒精，0.1％的新潔爾滅溶液，等等。
2.4無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。 　
2.5需要帶入無菌室使用的器械、平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴密，并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌。
2.6工作人員進入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75% 乙醇等消毒劑再次擦拭雙手)，方可進入無菌室進行操作。
2.7無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘，并且同時打開超凈臺進行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。
2.8供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開啟，以防污染。檢查前，用75％的酒精棉球消毒外表面。
2.9每次操作過程中，均應(yīng)做陰性對照，以檢查無菌操作的可靠性。
2.10吸取菌液時，必須用移液器吸取，切勿直接用口接觸吸管。
2.11接種針每次使用前后，必須通過火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。
2.12帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來蘇爾溶液或巴氏消毒液的消毒桶內(nèi)消毒，24小時后取出沖洗。
2.13如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3％的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。
2.14凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水下沖洗，嚴禁污染下水道。
2.15無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在層流無菌風(fēng)開啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無菌營養(yǎng)瓊脂平板5個，分別放置無菌室四周及中央位置，開蓋暴露30分鐘后，倒置于36℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，取出檢查。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個菌落/平皿，10000級潔凈室平均不得超過3個菌落/平皿。如超過限度，應(yīng)用臭氧發(fā)生器等對無菌室進行*消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。 
3.壓力蒸汽滅菌器的安全使用操作程序：
3.1堆放：將需滅菌的物品予以妥善包扎，各包之間留有空隙，依次堆放在滅菌桶的篩板上，以蒸汽穿透，提高滅菌效果。需滅菌物品外需黏上高壓指示膠帶以檢驗滅菌溫度是否達到要求。
3.2 加水：在鍋體內(nèi)注入生活用水，水位一定要超過電熱管2厘米以上（不宜過多）；連續(xù)使用時，每次操作前，必須補足上述水位，以免燒壞電熱管和意外發(fā)生。
3.3 密封：在每次使用高壓鍋前，都必須認真檢查高壓鍋的出氣伐和安全閥，確保其狀態(tài)完好，如有故障，在故障排除之前不得使用高壓滅菌鍋。把堆放好物品的滅菌桶放在鍋體內(nèi)，蓋上鍋蓋并鎖緊。
3.4 加熱滅菌：將滅菌器接通與銘牌一致的電源，按下電源開關(guān)，接通電源，指示燈亮，表示電源已正常輸入本器，按下開始按紐電熱管開始加熱工作；滅菌期間工作人員需監(jiān)視高壓鍋指示面板上的壓力、溫度和時間等。