2015版藥典--無菌檢查用隔離系統(tǒng)

自2010版GMP實(shí)施以來，隔離技術(shù)已經(jīng)在無菌制劑的生產(chǎn)中得到了廣泛的應(yīng)用。而2015版藥典的討論稿中，雖然在《無菌檢查法》中取消了對(duì)無菌檢查執(zhí)行的環(huán)境的明確規(guī)定，但是將隔離技術(shù)在無菌檢查中的應(yīng)用引入了藥典，增加了《無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則》。可見在中國(guó)，無菌檢查隔離器將成為一個(gè)的新趨勢(shì)。

從企業(yè)的成本角度來講，一方面，隔離器的使用從根本上有效的控制了假陽性的發(fā)生，避免了由于假陽性造成的企業(yè)損失和企業(yè)聲譽(yù)影響。另一方面，使用無菌檢查隔離器不但降低了無菌檢查操作環(huán)境的潔凈級(jí)別，而且簡(jiǎn)化了人員進(jìn)出的更衣過程，節(jié)省了背景環(huán)境的驗(yàn)證、日常消毒等額外的工作量。

然而，隔離技術(shù)在中國(guó)還是較新的技術(shù)，對(duì)于大多數(shù)中國(guó)制藥企業(yè)來說，對(duì)無菌檢查隔離器比較陌生，尤其不知道應(yīng)該如何使用，以及使用中應(yīng)該注意什么。本文結(jié)合了一些國(guó)內(nèi)外的案例，就無菌檢查的實(shí)際使用進(jìn)行了說明，以及對(duì)隔離器的操作和日常檢查提出了建議。

二、無菌檢查隔離器的應(yīng)用

實(shí)驗(yàn)室級(jí)別

就法規(guī)的角度而言，在《中國(guó)藥典》2015年版通則微生物內(nèi)容第三次公開征求意見的通知中的《無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則》：“建議不低于我國(guó)現(xiàn)行GMP中D級(jí)空氣潔凈度要求，……”

而國(guó)外主流法規(guī)，PIC/S，USP等均不要求無菌檢查隔離器的背景環(huán)境級(jí)別，僅要求對(duì)進(jìn)入的人員進(jìn)行控制。

從作者的角度理解來看，無菌檢查zui根本的目的是將藥品中真正的陽性檢查出來，用隔離器的目的是避免假陽性，因此，背景環(huán)境究竟是D級(jí)還是CNC，對(duì)于這個(gè)根本目的并不矛盾，不必要過多糾結(jié)在這個(gè)問題上。

作者所在的公司曾多次在生產(chǎn)車間環(huán)境下，在隔離器中進(jìn)行無菌檢查試驗(yàn)，未發(fā)生假陽性。

2. 隔離器選擇步驟

2.1 明確隔離器的類型

目前主流的主要有兩類無菌檢查隔離器：紊流的塑料軟艙體隔離器和單向流不銹鋼硬艙體隔離器兩類。

(1) 紊流的塑料軟艙體隔離器

這種隔離器是世界上zui早發(fā)明的隔離器之一，其優(yōu)點(diǎn)是輕便，便于移動(dòng)。由于材料是透明的，操作時(shí)的光線較好。缺點(diǎn)是軟質(zhì)的材料表面清潔擦拭不便，使用一定時(shí)間由于消毒滅菌，塑料材質(zhì)會(huì)老化變色。較硬艙體而言容易造成破損。在進(jìn)行汽化過氧化氫滅菌的過程中，PVC材質(zhì)容易吸附過氧化氫，從而造成通風(fēng)時(shí)間過長(zhǎng)。另外隔離器內(nèi)壓差不易穩(wěn)定控制。雖然法規(guī)上對(duì)無菌檢查隔離器的氣流形式要求紊流和單向流均可，但是越來越多的用戶傾向于選擇使用單向氣流。

(2) 單向流不銹鋼硬艙體隔離器

和塑料軟艙體隔離器相比，不銹鋼硬艙體隔離器重量較重，設(shè)備成本較高。但是設(shè)備的材料強(qiáng)度，使用壽命比軟艙體長(zhǎng)。對(duì)于滅菌消毒劑耐受性好，易清潔，工藝適應(yīng)性強(qiáng)。泄漏率更易保證。

2.2 隔離器的容積

在隔離器的選用中，如何選擇與自身測(cè)試批量相匹配的容積的隔離器很重要。一般隔離器供應(yīng)商會(huì)生成標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的隔離器（如下圖所示），適用于常規(guī)無菌藥品（如大輸液、西林瓶、安瓿瓶、滴眼劑等）10~15批次的擺放容積。

用戶應(yīng)首先明確列舉每日的測(cè)試量所用供試品的數(shù)量、包裝、尺寸規(guī)格，以及培養(yǎng)基、緩沖液的數(shù)量包裝和尺寸規(guī)格。并考慮日常工作排班情況選擇合適的隔離器容積，確保隔離器能裝載相應(yīng)的物料，同時(shí)不影響滅菌效果。如下圖所示為裝載后的隔離器腔體。

2.3 人體工程學(xué)

無菌檢查一般操作都會(huì)在4~5小時(shí)或者更長(zhǎng)，因此合理的人體工程學(xué)設(shè)計(jì)會(huì)減輕操作者的長(zhǎng)時(shí)間的疲勞，以及操作的便利性。

一般隔離器供應(yīng)商會(huì)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的隔離器進(jìn)行人體工程學(xué)設(shè)計(jì)，從設(shè)備的高度，手套的位置，操作平臺(tái)的高度，操作視窗的尺寸，集菌儀與手套口的相對(duì)位置等進(jìn)行考慮能適應(yīng)多數(shù)操作人員的需求。下圖舉例說明了在人體工程學(xué)上相應(yīng)的尺寸要求：

3. 無菌檢查在隔離器中的操作過程

3.1 裝載

首先準(zhǔn)備好所有需要放入隔離器中的供試品、培養(yǎng)基、緩沖液、過濾罐以及相應(yīng)的工具。按照經(jīng)過驗(yàn)證的裝載方式放入隔離器中。一般過濾罐會(huì)懸掛在隔離器上方的掛鉤上，供試品、培養(yǎng)基和緩沖液會(huì)放置在有間隙的層架上，物料之間不能緊貼在一起，避免滅菌死角。

裝載后關(guān)閉隔離器門，并且檢查隔離器門是否關(guān)好，通隔離器是否顯示報(bào)警。過目測(cè)或者使用手套檢漏儀對(duì)隔離器的手套完整性進(jìn)行檢查。

3.2 滅菌

按照經(jīng)過驗(yàn)證的滅菌參數(shù)，運(yùn)行隔離器的滅菌循環(huán)。根據(jù)艙體大小、裝載情況以及房間環(huán)境，滅菌周期時(shí)間在1.5~2.5小時(shí)。循環(huán)結(jié)束后檢查過氧化氫在箱體的殘留濃度，或者讀取在線過氧化氫低濃度探頭的讀數(shù)。

3.3 整理物料

將滅菌后的隔離器中的物料按照操作習(xí)慣進(jìn)行重新調(diào)整。以便于戴上隔離器手套后能夠拿到所需的物品。

3.4 環(huán)境檢測(cè)

在隔離器的使用過程中需要對(duì)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測(cè)，一般隔離器內(nèi)部集成有在線的粒子計(jì)數(shù)器，以及浮游菌采樣裝置。另外在隔離器的操作平面上要放置沉降菌的培養(yǎng)皿。在手套手指、手掌、儀器、包裝等表面進(jìn)行表面微生物取樣，待測(cè)試完成后傳遞出進(jìn)行培養(yǎng)。

3.5 根據(jù)藥典方法進(jìn)行無菌檢查。測(cè)試完成后，建議再對(duì)手套的手指、手掌部分的表面進(jìn)行微生物取樣。

3.6 轉(zhuǎn)移培養(yǎng)罐和清場(chǎng)

對(duì)于每天一次的測(cè)試，可以直接打開隔離器門，取出培養(yǎng)罐。如果是連續(xù)式的排班，則可以通過傳遞窗或者其他無菌轉(zhuǎn)移方式將培養(yǎng)罐傳遞出來。對(duì)于使用完的供試品包裝、培養(yǎng)基和緩沖液的包裝等可以打開隔離器門或者從傳遞窗轉(zhuǎn)移出來。

3.7 隔離器的清潔

隔離器在使用后需要進(jìn)行清潔，一般使用酒精或者異丙醇等對(duì)隔離器內(nèi)部進(jìn)行擦拭。擦拭的原則是從上到下，從后到前的順序。在擦拭時(shí)如果隔離器體積較大，可以使用的清潔工具對(duì)隔離器內(nèi)部進(jìn)行清潔。

3.8 連續(xù)使用隔離器

對(duì)于連續(xù)批次的無菌檢查，隔離器的主箱體門不開啟，通過傳遞箱或者另一個(gè)箱體將滅過菌的物料傳遞至主箱體中。在這種應(yīng)用時(shí)，更應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)隔離器內(nèi)部微生物的檢測(cè)。確定主箱體滅菌的zui低頻率。

4. 隔離器的手套

無菌檢查的操作對(duì)手套的使用操作頻繁，工藝過程中常常會(huì)用到剪刀、針頭或注射器，包括西林瓶鋁蓋的開封口，這些都會(huì)增加手套破損和加速老化。尤其是在手指部分。因此手套的完整性需要在操作前后進(jìn)行檢查。

手套的檢查方法有兩種：

(1)目測(cè)是zui簡(jiǎn)單，也zui便利的測(cè)試方法。一般將手套zui容易損壞的部位進(jìn)行適當(dāng)?shù)睦欤瑱z查是否有明顯破損。同時(shí)檢查手套是否有龜裂、老化現(xiàn)象。

(2)手套檢漏儀，利用保壓法來對(duì)手套進(jìn)行檢查。

手套的完整性檢查需要日常記錄。

通常在佩戴隔離器手套之前，操作者會(huì)先佩戴一層無菌手套。在國(guó)外的實(shí)際應(yīng)用中，有的操作者會(huì)在隔離器的手套外再戴一副無菌手套。下圖為在隔離器的手套上在戴一層無菌手套。

手套在滅菌過程中，應(yīng)該使用手套支撐架將手套撐開，確保手套表面能充分的暴露在滅菌氣體中。驗(yàn)證時(shí)候需要在手套手指部分也貼上指示劑。

一般建議手套根據(jù)使用情況定期更換，盡量避免在無菌檢查過程中去更換。如果在操作過程中發(fā)現(xiàn)手套被針頭扎破，如果不是很大的破損，隔離器沒有報(bào)警生成，則建議首先記錄這個(gè)事件發(fā)生的時(shí)間，操作的供試品編號(hào)或者培養(yǎng)罐編號(hào)；同時(shí)可以在破損處做一個(gè)表面微生物留樣，然后戴一層無菌手套，繼續(xù)做測(cè)試。

5. 總結(jié)

隔離器的使用是一個(gè)熟悉和認(rèn)知的過程，操作者需要充分了解在隔離器操作中的限制性，在正式測(cè)試前，多做幾次模擬，形成一個(gè)合理的SOP，并且考慮無菌檢查過程中可能出現(xiàn)的突發(fā)狀況，在隔離器中的處理方式。在不斷的實(shí)踐中更好的完善操作工藝。