防備細(xì)胞培育中污染的鏟除

一、污染的防范
    防范是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的方法。只有防范作業(yè)做在前，才華將發(fā)生污染的可能性降到小程度。一般防范可從以下幾方面著手：

（一）從操作者做起
1、操作者責(zé)任心要強(qiáng)，要仔細(xì)穩(wěn)重，操作技術(shù)要嫻熟。進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規(guī)定穿阻隔衣。進(jìn)入后關(guān)好門，坐下來盡量少走動。作業(yè)開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和炙烤瓶口。事先要嚴(yán)峻查看器材、溶液和培養(yǎng)物，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，更不能隨意運(yùn)用，防止形成大批污染。

2、操作者動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)翻開瓶口，并將瓶口滾動炙烤。操作時盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向反面。

3、操作時要常替換吸管，切勿一根吸管做到底。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口觸摸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗完畢及時拾掇，堅持實(shí)驗室清潔規(guī)整，zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺面。

（二）從物品、用品消毒滅菌著手
細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無菌實(shí)驗陰性后才華運(yùn)用。操作室及剩下的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。

（三）防止細(xì)胞交叉污染
在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時，所用用具要嚴(yán)峻區(qū)別，做上符號便于區(qū)分。并按次第進(jìn)行操作，防止一同進(jìn)行時易發(fā)生混亂。

在進(jìn)行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口，防止把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。

一切細(xì)胞一旦購置，或從別處引進(jìn)，或自己建立，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇，從頭培養(yǎng)。

    二、污染的*
    培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，大都較難處理。假如污染細(xì)胞價值不大，宜棄之；有細(xì)胞株留存的或可購置的，可在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或從頭購置細(xì)胞，再培養(yǎng)。若污染細(xì)胞價值較大，又難于從頭得到，可采納以下方法*。

（一）運(yùn)用抗生素
    抗生素對殺滅細(xì)菌較有用。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。防范用藥比污染后再用藥效果好。防范用藥一般用雙抗生素（青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL），污染后*用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后效果24～48小時，再換慣例培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有用。所用抗生素種類除青霉素、鏈霉素外，還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環(huán)素、制霉菌素等。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四環(huán)素處理，每隔2～3日換液1次，傳1～2代進(jìn)行治療。近年來有報道，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對殺滅支原體有用。這三種抗生素均用PBS配成250X濃縮液，-20℃保存?zhèn)溆茫\(yùn)用濃度Cip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL。運(yùn)用時先吸除污染的培養(yǎng)液，參加含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液，3天后再吸除培養(yǎng)液，參加含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液，培養(yǎng)4天，如此連續(xù)3個次第，直至用33258熒光染色鏡檢證明已*支原體后，再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次。

（二）運(yùn)用支原體特異性血清
    用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價1:320以上）可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個月后仍為陰性。但此法比較費(fèi)事，不如用抗生素便利、經(jīng)濟(jì)。

（三）加溫處理

將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時，可殺死支原體，但對細(xì)胞有不良影響。所以在處理前要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗，摸索能zui大極限殺死支原體又對細(xì)胞影響zui小的加熱時刻。此法有時不可靠。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。

（四）其他方法
    除了上述去除污染的方法外，還有動物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照耀的方法及過濾法等，但均較費(fèi)事，且效果不確定。所以一旦支原體污染，除非有特別重要價值，一般均棄之從頭培養(yǎng)。