一種廣泛適用的RNA提取方法

分離提取高質(zhì)量的RNA是基因表達(dá)、調(diào)控與基因工程等研究的基礎(chǔ)，而RNase、多糖及多酚類物質(zhì)嚴(yán)重干擾RNA的分離提取過(guò)程．現(xiàn)利用硅藻土對(duì)RNase的吸附性，結(jié)合PVP、高鹽及乙二醇丁醚沉淀等處理，建立了一種廣泛適用的RNA提取方法．在富含多糖的玉米胚乳，富含RNase的動(dòng)物肝臟，多酚多油脂的銀杏、麻瘋樹以及木霉、酵母等10多種RNA提取困難的動(dòng)、植物與微生物材料中都提取出完整性好，得率高的RNA．RT-PCR實(shí)驗(yàn)表明，提取的RNA能夠用于后續(xù)的分子生物學(xué)研究．硅藻土-苯酚法提取RNA的得率是異硫氰酸胍法的3倍多．此外， 將分離提取的總RNA經(jīng)過(guò)LiCl與PEG8000加NaCl沉淀步驟有效地去除了大片段RNA，以水稻Osa-mir-156的成熟序列設(shè)計(jì)特異引物做莖環(huán) RT-PCR，結(jié)果證明，富集得到的小RNA可以用于miRNA克隆等后續(xù)實(shí)驗(yàn)．