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上海酶聯生物研究所
上海酶聯生物研究所
閱讀：349發布時間：2013-11-29
ELISA試劑盒的原理
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既留存其免疫學活性，又留存酶的活性。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。因為酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。
ELISA的類型
ELISA試劑盒參數雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：
1） 將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2） 加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。
3） 加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4） 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色，測知標本中抗原的量。
在臨床檢修中，此法合用于檢修各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步法檢測。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結合物。
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