人臍血DC細(xì)胞 返回列表頁(yè)

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

樹(shù)突狀細(xì)胞（ Dendritic cells, DC）是機(jī)體功能強(qiáng)的專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞，它能高效地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力，成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞，處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。

DC的來(lái)源有兩條途徑：①髓樣干細(xì)胞在GM-CSF的刺激下分化為DC，稱(chēng)為髓樣DC，也稱(chēng)DCl，與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞；包括朗格漢斯細(xì)胞，間皮（或真皮）DCs以及單核細(xì)胞衍生的DCs等，②來(lái)源于樣干細(xì)胞，稱(chēng)為樣DC或漿細(xì)胞樣DC，即DC2，與T細(xì)胞和NK細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞。

樹(shù)突狀細(xì)胞 (DC)表面具有豐富的抗原遞呈分子、共刺激因子和粘附因子，是功能強(qiáng)大的專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞(APC)。DC自身具有刺激能力，是目前發(fā)現(xiàn)的惟一能激活未致敏的初始型T細(xì)胞的APC。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來(lái)源于臍血。

2)細(xì)胞鑒定：CD11c熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：半懸浮細(xì)胞。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代 樹(shù)突狀（ DC） 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA 試劑盒

Rat apolipoprotein B100 (apo-B100) ELISA Kit 大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)檢測(cè)試劑盒

Humanai-hepatitisDvirusaibody,ai-HDVELISAKit 人抗丁型肝病毒抗體(ai-HDV)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanHeatShockProtein60,HSP-60檢測(cè)試劑盒人熱休克蛋白60(Hsp-60)檢測(cè)試劑盒

組織副氏菌A(SalmonellaParatyphiA)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次

HumanMaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)檢測(cè)試劑盒

ERBB3重組人 HER3 / ErbB3 蛋白  Protein

三葉因子1(TFF1)重組蛋白 Recombinant Trefoil Factor 1 (TFF1)

DHRS9重組人 DHRS9 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ADH7 Protein Human 重組人 CAMK2A / CAMKA 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白

三葉因子1(TFF1)重組蛋白 Recombinant Trefoil Factor 1 (TFF1)

ADH7 Protein Human 重組人 CAMK2A / CAMKA 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

ERBB3重組人 HER3 / ErbB3 蛋白  Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白

DHRS9重組人 DHRS9 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

植物纖維素酶(CE)檢測(cè)試劑盒

Human ai calmodulin specific aibody (CAM-ab) ELISA Kit 人抗鈣調(diào)素特異抗體(CAM-ab)檢測(cè)試劑盒

Porcineendothelin1,ET-1ELISAKit 豬內(nèi)皮素1(ET-1)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAFP-L3ELISAKit小鼠小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3

血液A含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Mousethyroidstimulatinghormonereceptoraidoby,AbELISAKit小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)檢測(cè)試劑盒

人臍血DC細(xì)胞植物激素脫落酸（ABA）ELISAKit   ELISA. 

植物K1(VK1)ELISAKit   ELISA. 

植物B12(VB12)ELISAKit   ELISA. 

植物A(VA)ELISAKit   ELISA.