NK細胞活性檢測方法

    NK細胞是一種異質性、多功能的細胞群，具有抗腫瘤、抗感染和免疫調節功能，并參與移植排斥反應和某些自身免疫性疾病的發生，因而通過制備NK細胞克隆對其功能進行研究已受到人們的高度重視。測定人NK細胞活性多以K562細胞株作為靶細胞，而測小鼠NK細胞活性則用YAC細胞株，檢測方法多種多樣。

(一)形態法

    將效應細胞與靶細胞按一定比例混合溫育，繼而用臺盼藍或伊紅Y等活細胞拒染的染料處理，然后分別計數著染的死細胞和不著染的活細胞，推算NK細胞活性。

1．材料

(1)靶細胞：K562細胞株或YAC細胞株。

(2)效應細胞：NK細胞。

(3)含15％NCS的RPMI 1640培養液，5％臺盼藍染色液。

2．方法：

(1)效應細胞的制備：將克隆的NK細胞用含15％NCS的RPMI 1640培養液懸浮，計數后調整細胞濃度至l×107／ml，備用。

(2)靶細胞的制備：取經24h培養的靶細胞，用RPMI 1640培養液洗滌1次，1000r／min離心6min。棄上清液，用：RPMI 1640培養液重懸后計數，并用0．5％臺盼藍染色計數，活細胞數達95％以上時可用作靶細胞。以RPMI l640培養液調整至1×105／ml，備用。

(3)效應細胞靶細胞作用：用40孔培養板，對照組1～3孔，每孔加100μl靶細胞，再加入RPMI 1640培養液100μl；實驗組4～6孔，每孔加100gl靶細胞，再加入效應細胞100μl，效應細胞與靶細胞的比例為50：1。混勻，置5％CO2 37℃孵箱中培養過夜。

3．結果分析取m培養板，將細胞輕輕混勻成懸液，從每孔中取出30μl細胞懸液，加等量O．5％臺盼藍染液混合。室溫下5min后，計數白細胞數。對照組和實驗組每孔各計數100個細胞，分別記錄死亡細胞和活細胞數，求出各組NK細胞活性的均值。

(二)酶釋放法

    將效應細胞與靶細胞按一定比例混合溫育，離心沉淀，取上清液檢測靶細胞遭破壞后釋放出的酶含量。

(三)熒光法

    用熒光素標汜靶細胞，經與效應細胞共溫后，離心去上清液，用熒光計檢測剩余的活靶細胞的熒光。

(四)核素法

    將效應細胞與靶細胞按一定比例混合共溫后，離心檢測上清液或剩余靶細胞放射性的量，間接反映其活性。有靶細胞胞漿釋放法和胞核釋放法兩種。

(五)化學發光法

    當效應細胞與靶細胞接觸時，效應細胞呼吸暴發，生成極不穩定的O 2-及OH一，放出光子，在發光劑存在條件下，可被光電倍增管接受和計數，發光量與NK細胞殺傷能力相關。