血清總補體溶血活性（CH50）的檢測方法

 血清總補體溶血活性（CH50）測定方法

一、原理
利用綿羊細胞與相應抗體（溶血素）結合成的復合物，可激活血清中的補體，導致紅細胞溶解，當紅細胞和溶血素量一定時，在規定反應的時間內，溶血程度與補體量及活性呈正相關。在接近50%溶血（CH50）時，二者之間近似直線關系，故以50%溶血作為最敏感的判斷終點。以引起50%溶血所需的最小補體量為一個CH50U，可計算出待測血清中總的補體溶血活性，以CH50U/ml表示。
 本實驗主要反映補體經典活化途徑的溶血功能，其結果與補體C1～C9各組成分的量及活性均有關。

二、試劑及配制
1.緩沖生理鹽水：
（1）貯存液：
     Na2HPO4.12H2O        2.85g
     KH2PO4               0.27g  
     NaCl                17.00g
     蒸餾水定容至100ml，4℃保存備用
（2）應用液：5ml貯存液加95ml蒸餾水，再加10%硫酸鎂0.1ml，當日配制，12小時內使用。
2.2%綿羊紅細胞：無菌采取綿羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液洗3次，并配成2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標                準化。
3.溶血素：將綿羊紅細胞溶血素（效價1:4000），用應用液做1:2000倍稀釋（即1ml溶血素加1999ml應用液）。
4.待測血清：新鮮血液室溫放置30min，再4℃放置60min，使血塊收縮，4℃離心（3000r/min）10min，取上清，-20℃保存。
三、操作步驟
試管法（改良Mayer法）
1.致敏羊紅細胞：2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素（1:2000），混勻，置37℃水浴30min。
2.稀釋血清：待測血清0.2ml，加應用液3.8ml，稀釋度為1:20。
3.配制溶血標準管：全溶血管:2%綿羊紅細胞2ml加8ml蒸餾水，混勻。50%溶血管:取全溶血管液2ml加緩沖液2ml。
4.按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置37℃水浴30min，第10管為非溶血對照：
補體CH50測定試管法

5.結果測定：取出試管，2000r/min離心10min，對照管應不溶血。肉眼比色，選與50%溶血標準管相近二管，再用分光光度計測（波長542nm、0.5cm比色杯）OD值，確定與標準管最接近者為終點管，然后按下公式計算CH50值：血清補體CH50（U/ml）=（1/血清用量）×稀釋度。
如第5管為終點管，測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。