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        細菌污染的鑒別

        時間:2016-4-26閱讀:160
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        1、細菌、真菌污染的檢測

          (1)肉眼觀察

          細菌、真菌污染常在傳代、換液、加樣等開放性操作之后發生,而且增生迅速,若有污染,在48小時內可明顯觀察到,例如培養液變混濁,或略加振蕩有很多漂浮物漂起。

          (2)接種觀察

          采用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養液接種,也可發現是否有污染。

          (3)鏡下觀察

          在倒置顯微鏡的高倍鏡下可見培養液中有大量圓球狀顆粒漂浮,即為細菌污染。

          若細胞之間有絲狀、管狀、樹枝狀或卵形的物質常為真菌污染。

          2、支原體污染的檢測

          (1)相差顯微鏡觀察

          直接取少許培養液滴在載物片上,再蓋上蓋片觀察,支原體在鏡下呈暗色微小顆粒,多位于細胞與細胞之間,有時可見類似于布朗運動的表現。應注意與細胞破碎溢出的內容物如線粒體等相區別。

          (2)熒光染色法觀察

          用熒光染料Hoechst33258,此染料能與DNA特異地結合,可使支原體內的DNA著色,熒光顯微鏡下支原體呈綠色小點,散在于細胞周圍或附于細胞表面。

          (3)電鏡檢測

          若條件許可,可用掃描電鏡或透射電鏡觀察。一般在細胞培養48~72小時,細胞接近匯合前,用*消化細胞制成細胞懸液后進行固定、包埋、切片后才能進行觀察。

         (4)培養檢測

          將細胞懸液5mL加入45mL支原體肉湯培養基,培養14天后觀察肉湯培養有無霧狀沉淀,然后取0.5ml加入已冷卻到50℃的培養基中,再用瓊脂培養基做分離培養,37℃培養3天觀察有無“荷包蛋”菌落出現。

          3 、病毒的檢測

          1) 應用電鏡技術快速診斷動物病毒病 

           2) 逆轉錄_聚合酶鏈反應RT_PCR檢測病毒

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