(一)貼壁細胞(包括半貼壁細胞的換液)

    初代培養(yǎng)成功，由于營養(yǎng)缺乏，代謝產(chǎn)物增多，細胞未達到飽和密度，仍需繼續(xù)培養(yǎng)，因此，需采取換液方式來更新營養(yǎng)成分以滿足細胞繼續(xù)生長繁殖的需要。其換液方法比較簡單．即棄去舊液，加人與原培養(yǎng)液相同的等量*培養(yǎng)基。

(二)懸浮細胞

1.淋巴細胞的短期培養(yǎng)無需換液，但加人生長因子或有絲分裂原(PHA、PMA、co一nA、PWM、LPS等)后，細胞不僅會發(fā)生轉(zhuǎn)化而且會發(fā)生分裂繁殖，此時培養(yǎng)基中的營養(yǎng)或分并不能維持細胞的營養(yǎng)需求，代謝產(chǎn)物增多，細胞不適宜生長，需進行換液。

2．白血病細胞或淋巴瘤細胞體外長期培養(yǎng)時，采用半量換液的方式，待達到飽和密度時才能傳代。半量換液的方法如下：

(1)將原培養(yǎng)瓶豎起，在30min內(nèi)，若細胞沉于瓶底，可用吸管輕輕吸去一半上清液棄去，再加入等量的新鮮*培養(yǎng)基。

(2)細胞不能沉于瓶底，可吸出細胞懸液，采用低速離心(1000r／min 10min)棄去一半上清液加入等量的新鮮*培養(yǎng)基，混勻后再轉(zhuǎn)入原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

三、初代細胞培養(yǎng)的傳代

    初代培養(yǎng)后由于貼壁細胞的相互匯合，使整個瓶底逐漸被細胞覆蓋；懸浮細胞增殖，數(shù)量增加甚至達飽和密度，細胞難以繼續(xù)生長繁殖，需要進行分瓶培養(yǎng)，這種使原代細胞經(jīng)分散接種的過程稱之為傳代。每進行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代，傳至5～10代以內(nèi)的細胞通常稱為次代培養(yǎng)細胞，傳至10～20代以上的細胞，通常確定為傳代細胞(或稱傳代細胞系)，初代培養(yǎng)的傳代是關(guān)鍵。應注意如下幾點：

1．初代培養(yǎng)的貼壁細胞生長密度不高時，或未能達到覆蓋整個瓶底時不能急于傳代。

2．初代培養(yǎng)的貼壁細胞多為混合細胞，形態(tài)各異，往往是上皮樣細胞和成纖維樣細胞并存，采用*消化時要掌握好消化時間。

3．吹打已消化的細胞要輕巧，以盡可能減少對細胞的機械損傷。

4．傳代時細胞接種數(shù)量要多一些，以利于細胞的生存和繁殖。如果消化分離的細胞懸液有組織塊，也一并傳人到培養(yǎng)瓶，盡量減少細胞損失。