熱引導(dǎo)的抗原決定簇修復(fù)（Heat Induced Epitope Retrieval，HIER）對大多數(shù)的抗體有益，尤其是對核抗原的修復(fù)作用更加明顯，zui常用的抗原修復(fù)液是pH6.0的枸櫞酸緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液，它們的作用原理是通過鈉離子的螯合而實(shí)現(xiàn)的。抗原修復(fù)液的PH值非常重要，有效的抗原修復(fù)pH值要比修復(fù)液的化學(xué)成分更重要，同樣的修復(fù)液隨著PH值的升高染色的強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，但*PH值范圍為6.0~10.0，對于大多數(shù)抗原這個范圍的pH值都能進(jìn)行有效的修復(fù)，有些抗體（如Ki-67、ER）則在PH值l.0~3.0和6.0~8.0更為有效。作為通用修復(fù)液堿性pH值的修復(fù)液要比酸性的有效，而對固定很長時間舊的存檔組織，酸性pH值的修復(fù)液則優(yōu)于堿性的修復(fù)液，所以兩種抗原修復(fù)液可作為相互替補(bǔ)的進(jìn)行抗原修復(fù)。在進(jìn)行HIER過程中應(yīng)防止切片的干燥，加熱時必須達(dá)到規(guī)定的溫度，保溫時間要足夠，對于一些不要抗原修復(fù)的抗體不要采用HIER處理，否則對染色無益，但有些抗體則需要利用多種修復(fù)聯(lián)合應(yīng)用。HIER方法有：

（1）水浴加熱法  將脫蠟人水后的切片放人盛有修復(fù)的容器中，放人加熱煮沸水中，當(dāng)修復(fù)液溫度達(dá)到95℃左右時計時l5min，自然冷卻，PBS洗3min×3次。

（2）微波加熱法  將切片放入修復(fù)液中微波加熱使溫度在96℃左右，計時l0min，在微波爐中停留2min，室溫自然冷卻，PBS洗3min×3次。

（3）高壓加熱法  將修復(fù)液在高壓鍋中煮沸，切片插在染色架上，放入鍋中（要使修復(fù)液淹沒切片）開始噴氣時蓋上壓力閥。計時2min，冷水沖至室溫取出切片，PBS洗3min×3次。抗體