在什么情況下使用Triton-X100？

（1）Triton X-100化學名稱為聚乙二醇辛基苯基醚，是一種去污劑。在免疫組織化學（%26gt;10um厚切片） 和免疫細胞化學中一般用Triton X-100 作為細胞通透劑，在膜上打孔。

（2）其作用原理：Triton X-100 可以溶解細胞膜、細胞核膜、細胞器膜上的脂質而使抗體及大分子結構的物質進入胞漿和胞核內，故在細胞免疫組化時尤為推薦使用，這樣抗體就能順利進入胞內與相應抗原結合。

（3）Triton X-100既是一種表面活性劑，也有抗氧化作用。

封閉血清的選擇原則是什么？

（1）膜上或切片上有剩余的位點可以非特異性吸附抗體，造成后續結果的假陽性！

（2）封閉血清一般是和二抗同一來源的，血清中動物自身的抗體，預先能和組織中有交叉反應的位點發生結合，否則在后面的步驟中如果和二抗發生結合，會造成背景。

（3）也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能與一抗來源一致。

抗體孵育條件的比較？

（1）一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果*；孵育時間：這與溫度、抗體濃度有關，一般37度1-2h,而4度過夜和從冰箱拿出后37度復溫45min。

（2）二抗一般室溫或37度30min-1h，具體時間需要摸索。