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南京科捷檢測科技發展有限公司
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閱讀：635發布時間：2020-11-12
硒是人體必需微量元素，存在于抗氧化酶和甲狀腺素代謝酶的活性中心，缺硒導致克山病，合理補硒可有效減少人類及動物罹患癌癥的風險。蛋氨酸中硫被硒取代后得到硒代蛋氨酸，是生物利用度zui高的有機硒化物，人體吸收后可在體內形成硒儲備池。富*是被廣泛研究的食品硒補充劑，在培養基中加入無機硒，利用酵母將難吸收的無機硒源轉化為易吸收的有機硒源。將富*納入飲食中作為硒補充劑可減少大約50%的癌癥發病率與死亡率。作為硒代蛋氨酸的來源，富*中總硒的70%-76%以硒代蛋氨酸的形式存在，富*中硒代蛋氨酸的含量對評價其質量與營養價值具有重要意義。
目前，國外測定富*中硒代蛋氨酸的方法有高效液相色譜串聯電感耦合等離子體質譜法（HPLC-ICP-MS），高效液相色譜串聯質譜法（HPLC-MS），毛細管電泳-電化學發光法（CE-ECL）等，國內相關文獻較少。本實驗針對富*中硒代蛋氨酸進行分析，采用酶解法進行樣品提取，通過對樣品的色譜分離及衍生等條件進行研究，建立丹磺酰氯（DNS-CI）柱前衍生高效液相色譜-熒光法測定富*中硒代蛋氨酸。
儀器準備
儀器簡介
LC-600A智能全控液相色譜系統由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構成等度分析系統。使用WS600工作站可以同時控制數臺P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等，實行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。
應用領域
化合物檢測、法醫毒物分析、蛋白質組學食品檢測、藥物分析、環境分析、聚合物分析
樣品提取：
稱取0.1g經冷凍研磨的富*原料（或0.5g富*產品），置于10mL離心管中，加入5mL0.05mol/L磷酸氫鈉緩沖液（pH=7.4），40mg蛋白酶XIV，充分混勻后于37℃搖床振搖24h。振搖結束后向樣品酶解液中加入0.1mL1.5g/L亞鐵**化鉀溶液及0.1mL3g/L乙酸鋅溶液，充分混勻后在3000r/min下離心10min，取上清液待測，用80mmol/L碳酸鈉緩沖液（用1mol/LHCI調節pH至9.5）適當稀釋，使樣品含量在方法線性范圍內。
色譜條件：
色譜柱 | Pursuit XRs C18色譜柱（250mm×4.6mm,5μm） |
檢測器 | 熒光檢測器 |
激發光波長 | 320nm |
發射波長 | 523nm |
柱溫 | 30℃ |
進樣量 | 10μL |
流動相 | 乙腈-10mmol/L*緩沖液（含4%N，N-二甲基甲酰胺pH=6.55） |
流速 | 1.0mL/min |
梯度洗脫程序 | （T，乙腈%）0min，14%；5min，20%；10min，25%；12min，25.6%；15min，25.7%；19min，25.9%；23min，26.5%；30min，27%；34min,30%;38min,43%;41min,68%;45min,68%;47min,86%;52min,86% |
譜圖分析：
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