豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。
1、 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、 棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使用前15分鐘內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時。
3、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4、 每孔加HRP Conjugate工作液（臨用前15分鐘內(nèi)配制）100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。
5、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止）。
7、 每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。
9、 實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)：
1、 保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊或旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，否則可能會出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2、 酶標(biāo)板：剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
3、 加樣：加樣或加試劑時，*個孔與zui后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。每次的加樣時間控制在10分鐘內(nèi)。*設(shè)置復(fù)孔實(shí)驗(yàn)。
4、 溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時必須給酶標(biāo)板覆膜；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。
5、 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水。在讀數(shù)前要注意清除孔底殘留的液體和手指印，以免影響酶標(biāo)儀讀數(shù)。
6、 試劑配制：Detection Ab及HRP Conjugate體積較小，運(yùn)輸過程會使液體沾到管壁或瓶蓋，因此使用前請手甩幾下或1000轉(zhuǎn)/分離心1min，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。標(biāo)準(zhǔn)品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液請依據(jù)所需的量配制使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請精確配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取Detection Ab時，一次不要小于10μl），以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、Detection Ab工作液、HRP Conjugate工作液。若需要分次使用標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按照每一次用量分裝，將其放在-20～-80℃貯存。避免反復(fù)凍融。
7、 反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如每隔5分鐘），如梯度已很明顯，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免顏色過深影響酶標(biāo)儀讀數(shù)。
8、 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
9、 混勻：充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微 量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻。
10、 安全：試驗(yàn)中請穿著試驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測血液或者其他體液標(biāo) 本時，請按國家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條例執(zhí)行。
11、 不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）
12、 試驗(yàn)中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁混用，否則將影響試驗(yàn)結(jié)果！
豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒結(jié)果判斷:
1. 每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. *使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，然后將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
3. 若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)
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