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        魚總?cè)饧谞钕僭彼岷繙y定(TT3)Elisa試劑盒說明書

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        應用雙抗體夾心法測定標本中魚總?cè)饧谞钕僭彼?TT3)水平。用純化的魚總
        三碘甲狀腺原氨酸(TT3)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總
        三碘甲狀腺原氨酸(TT3)抗原,再與HRP 標記的總?cè)饧谞钕僭彼?TT3)抗體結(jié)合,形成
        抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下
        轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總?cè)饧谞钕僭?br />酸(TT3)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品
        中魚總?cè)饧谞钕僭彼?TT3)濃度。

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        5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器
        將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待
        檢測,其余冷凍備用。
        6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上
        進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
        7. 不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
        操作步驟:
        1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10 孔,在*、第二孔中分別加標
        準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二
        孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,
        混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔
        中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
        取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混
        勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準
        品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
        濃度分別為18pmol/L,12pmol/L ,6pmol/L,3pmol/L,1.5pmol/L)。

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