實驗方法原理：人抗突觸前膜抗體（PsmAb）ELISA試劑盒  

 T 細胞在體外培養時，受到非特異性有絲分裂原（如PHA、ConA）刺激后，可出現細胞體積增大，代謝旺盛，蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細胞轉化。淋巴細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞免疫水平，因此可作為測定機體免疫功能的指標之一。淋巴細胞轉化試驗有形態計數法、MTT 法和同位素法三種。MTT 法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法。MTT 是一種噻唑鹽，化學名3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-

試劑、試劑盒：人抗突觸前膜抗體（PsmAb）ELISA試劑盒

1. RPMI1640 培養液2. Hank’s 液3. 刀豆蛋白A（Concanvalin A, ConA），用RPMI1640 液配成1mg/ml，分裝小瓶，冷凍保存4. MTT 1mg/ml5.

實驗步驟：人抗突觸前膜抗體（PsmAb）ELISA試劑盒

1. 小鼠脾細胞懸液的制備：取一個滅菌的平皿，加入5ml Hank’s液。頸椎脫臼法處死小鼠，取脾臟，放入平皿中，在鋼網上研磨并過篩，制成細胞懸液。取出100μl用于計數。將其余細胞懸液移入一離心管中，離心1500rpm，7min，（或1000rpm，10min）棄去上清，用RPMI1640 培養液稀釋，制成2.5×106 / ml的脾細胞懸液，然后加入ConA使每孔zui終濃度為2μg/ml，同時做不加ConA的陰性對照孔。2. 將上述細胞懸液加入96 孔平底培養板中，每孔0.1ml。3. 將培養板放入含有5%CO2的37℃培養箱中培養48-72 小時，在培養結束前4-6 小時，于培養板各孔內加入1mg/mlMTT液，10μl/孔。37℃培養6 小時。4. 各孔內加入0.01M 鹽酸—異丙醇110μl，30 分鐘內（或加2%SDS 100ul/孔，過夜）用酶標測定儀測OD 值，測定波長570nm。5. 實驗結果將實驗組和對照組三個復孔的OD 值平均。轉化值=實驗組的平均OD 值-對照組的平均OD 值。 注意事項 1. 由于本實驗需要培養3 天，才能觀察結果。因此，在操作時應注意無菌操作，避免細菌污染，導致實驗的失敗。2. 細胞操作要輕柔、迅速，以免細胞損傷影響實驗結果。

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