大鼠卵清蛋白特異性IgE （OVA sIgE）ELISA試劑盒

本試劑盒僅供研究使用

 特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關蛋白無交叉反應。

有效期：6個月           

預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中的量。

北京雅安達生物技術有限公司提供外包服務：小鼠單抗Ig類/亞類鑒定、獸用抗病毒 藥物的細胞水平檢測（比如干擾素等）多肽半抗原的偶聯、親和層析柱制備（客戶提供抗原抗體）咨詢（  ）

說明                                                          

1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。

2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3．中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。

4．剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正?，F象，不會對實驗結果造成任何影響。

實驗原理

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、*化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制

1.         酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2.         標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3.         樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.         *標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.         辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6.         *標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7.         辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8.         底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9.         濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10.     終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

需要而未提供的試劑和器材

1.         標準規格酶標儀

2.         高速離心機

3.         電熱恒溫培養箱

4.         干凈的試管和Eppendof管

5.         系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6.    蒸餾水，容量瓶等

標本的采集及保存

1.         血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.         血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.         細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

標本的稀釋原則：

首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。

標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內配制。

如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。