菌種保存培養(yǎng)基

中文名	菌種保存培養(yǎng)基
英文名	Strain Store Medium
用途	用于常用細菌斜面?zhèn)鞔笆覝乇４?/td>
配方（g/L）	蛋白胨牛肉浸粉氯化鈉 * 瓊脂 pH值7.5±0.1 10.0 5.0 3.0 2.0 4.5 25℃
原理	蛋白胨、牛肉浸粉提供氮源，維生素，生長因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；*作為緩沖劑；瓊脂是凝固劑。
用法	稱取本品24.5g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝于螺旋蓋試管內(nèi)的3/4左右高度, 121℃高壓滅菌15分鐘,備用。
質(zhì)量控制	在36±1℃培養(yǎng)18-24小時。質(zhì)控菌株菌株編號生長情況其它特征 * ATCC25923 +++ 有黃色色素化膿性鏈球菌 ATCC12344 +++ 無色透明小菌落單增李斯特氏菌 ATCC19114 +++ 無色透明小菌落大腸埃希氏菌 ATCC25922 +++ 無色透明大菌落沙門氏菌 ATCC14028 +++ 無色大菌落銅綠假單胞菌 CMCC10104 +++ 有綠色色素蠟樣芽孢桿菌 ATCC11778 +++ 白色不規(guī)則菌落

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培實驗操作方法
　　3.1　藥敏片法
　　3.1.1　在“超凈臺”中，用經(jīng)（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式；用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布于平皿。（另：可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密，直接懸液法要把菌液濃度用生理鹽水或PBS調(diào)到0.5個麥氏標準再涂布均勻。）
　　3.1.2　將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀察結(jié)果，要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上；一般可在平皿*貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼七片），每種藥敏片的名稱要記住。
　　3.1.3　將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時后，觀察效果。
　　3.2　牛津杯法　　
　3.2.1　在“超凈臺”中，用經(jīng)（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式；用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布于平皿。（另：可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密。）
　　3.2.2　以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管（內(nèi)徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養(yǎng)基上，輕輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無空隙，并在小管處標記各種藥物名稱。每個平板可放4-6支小管。待分鐘后，分別向各小管中滴加一定數(shù)量的各種藥液，勿使其外溢。置37℃培養(yǎng)8-18小時，觀察結(jié)果。
　　3.2.3　將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時后，觀察效果。
　　3.3　打孔法：
　　該法較簡單，成本低，易操作，比較適用于商品藥物的檢測。
　　3.3.1　在“超凈臺”中，用經(jīng)（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細菌培養(yǎng)物，以劃線方式將細菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式；用滅菌接種環(huán)取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布于平皿。（另：可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密。）
　　3.3.2　以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管（外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培養(yǎng)基上打孔，將孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出，并以火焰封底，使培養(yǎng)基能充分的與平皿融合（以防藥液滲漏，影響結(jié)果）。
　　3.3.3　加樣：按不同藥液加樣，樣品加至滿而不溢為止。
　　3.3.4　將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時后，觀察效果。