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上海哈靈生物科技有限公司
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公司信息
細胞活力藍色熒光（DAPI）檢測試劑盒產品說明書
2017-4-6 閱讀(1088)
10008 v.A
細胞活力藍色熒光（DAPI）檢測試劑盒產品說明書
主要用途
細胞活力藍色熒光檢測試劑是一種旨在通過使用熒光染料DAPI與染色體DNA的結合并發出熒光檢測信號來測定活體細胞和死亡細胞之比例的而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。適用于各種生長中的動物或人體細胞。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，著色清晰。
技術背景
作為細胞DNA染色劑之一的4，6－二咪基－4-聯苯基吲哚（ 4，6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特異性地與DNA雙螺旋的凹槽部分發生相互作用，從而與DNA的雙鏈緊密結合。結合后產生的熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激發波長356nm，使得DAPI成為了一種常用的熒光檢測信號。
產品內容
緩沖液（Reagent A） 毫升
固定液（Reagent B） 毫升
染色液（Reagent C） 微升
裂解液（Reagent D） 微升
產品說明書 1份
保存方式
保存染色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent C）避免光照，有效保證6月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（）：用于細胞脫離
*細胞培養液（）：用于混勻細胞的培養基
15毫升錐形離心管：用于細胞操作的容器
臺式離心機：用于細胞沉淀收集
1.5毫升離心管：用于細胞檢測操作的容器
熒光顯微鏡：用于觀察染色并具熒光的細胞
血細胞計數器：用于細胞計數
實驗步驟
1． 開啟熒光顯微鏡
2． 移取25cm2細胞培養瓶里的培養液到新的15毫升錐形離心管（收集所有漂浮細胞）
3． 加入xx毫升緩沖液（Reagent A）到細胞培養瓶，清洗生長中的細胞表面
4． 抽去xx毫升清洗液到15毫升錐形離心管
5． 加入xx毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養平面
6． 置入37℃培養箱1分種
7． 輕輕震動培養瓶，使細胞脫落，然后加入5毫升用戶自備的*細胞培養液
8． 移入15毫升錐形離心管
9． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g
10．小心抽去上清液
11．加入xx毫升緩沖液（Reagent A），充分混勻（注意：參見注意事項5）
12．移出xx微升細胞樣品到1.5毫升離心管
13．加入xx微升固定液（Reagent B）到1.5毫升離心管
14．用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
15．加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
16．用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
17．移出xx微升離心管中的混勻物到血細胞計數器的前池
18．加入xx微升裂解液（Reagent D）到1.5毫升離心管
19．用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
20．移出10微升離心管中的混勻物到血細胞計數器的后池
21．在（倒置）熒光顯微鏡（10倍）紫外波長下，觀察并計數（注意：參見注意事項6）
22．血細胞計數器前池樣品顯示熒光細胞核的為死亡細胞，而血細胞計數器后池樣品顯示熒光細胞核的為細胞總數
23．確定活體細胞和死亡細胞的比例
注意事項
1． 本產品為50次操作
2． 本產品可用于懸浮細胞，直接從實驗步驟8開始
3． DAPI為半通透性染料，不能染色活細胞
4． 本產品的裂解液（Reagent D）能夠充分溶解紅細胞，因此可用于計量血液中有核細胞
5． 建議待測細胞樣品為每毫升1 X 106細胞濃度左右
6． 細胞計數時乘上稀釋倍數104。標準血細胞計數器（Hemocytometer）的計算方法是：
1毫米方塊的細胞計數X 104（稀釋倍數）＝實際細胞數/毫升
7． 本產品可直接染色生長中的貼壁細胞，染色液和培養液比例為1：100
8． 本公司提供系列細胞繁殖和活力檢測試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定熒光清晰
