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上海哈靈生物科技有限公司
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公司信息
線粒體呼吸鏈復合物III活性比色法定量檢測試劑盒產品說明書
2016-6-21 閱讀(509)
主要用途
我公司線粒體呼吸鏈復合物III（輔酶Q-細胞色素C還原酶）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用還原性合成輔酶Q同功類似物和特異性抑制劑，通過反應系統測定樣品中細胞色素C還原后峰值的增高，即采用比色法測定樣品中酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種純化線粒體樣品（動物、人體、酵母）以及細胞或組織裂解懸液樣品的輔酶Q-細胞色素C還原酶的特異性活性檢測。可用于衰老、能量代謝、蛋白組學、病理身理學、神經病變等研究。產品不含污染性蛋白酶，嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，反應優化，檢測敏感。
注意事項
- 本產品為21次操作（10個樣本），包括1次背景對照測定
- 操作時，須戴手套
- 系統操作過程中，背景測定只需1次
- 線粒體樣品檢測前，須溶解；建議凍存融解（－70℃至37℃）循環3次
- 如果增強酶活檢測，建議使用線粒體復合物待測樣品預處理試劑盒－10342
- 每增加1個樣品，增加反應工作液為：反應液（Reagent B）5微升＋穩定工作液5微升，以此類推。配制反應工作液時，須根據樣本數量配制實際工作液容量
- 用戶可以根據實際樣品，計算緩沖液（Reagent A）、反應工作液和底物液（Reagent D）三者之和，混勻后，室溫下靜置10分鐘，置于冰槽里等待檢測
- 加入樣品啟動反應后3秒內即刻比色測定
- 分光光度計波長嚴格設置在550nm，誤差10nm將不產生信號
- 測定可以持續2分鐘
- 測定值由低到高變化，即2分鐘測定讀數高于0分鐘測定讀數，表明有酶活性
- 比色測定后，比色皿須清洗*
- 建議用戶使用分光光度儀檢測，總體系減半可以增加檢測樣本數
- 建議待測樣本線粒體蛋白濃度為10微克/100微升；如果樣本酶活性過低或過高，則可以增加或降低樣本量；注意計算公式的調整（本公司提供線粒體溶解試劑盒HL10018為后續的線粒體蛋白濃度測定的預處理試劑盒和 Bradford蛋白質濃度定量試劑盒HL30030.1）
- 如果使用細胞或組織裂解懸液，則蛋白濃度為50微克/100微升
- 樣品特異活性是指抗霉素敏感的輔酶Q－細胞色素C還原酶，去除其它干擾因素（例如復合物I/II/IV等）
- 線粒體呼吸鏈復合物III（輔酶Q－細胞色素C還原酶）單位活性定義為：在30℃，pH 7.5條件下，每分鐘內能夠氧化1微摩爾還原型泛醌（CoQH2）所需的酶量作為一個活性單位
- 本公司提供系列線粒體及其酶類技術產品
- 如：
- 線粒體呼吸鏈復合物II（琥珀酸－輔酶Q還原酶）活性定量檢測試劑盒
- 線粒體呼吸鏈復合物II（琥珀酸－輔酶Q還原酶）活性定量檢測試劑盒
- 線粒體呼吸鏈復合物IV（正鐵細胞色素C－氧化還原酶）活性定量檢測試劑盒
- 線粒體呼吸鏈復合物V（F0F1-ATP酶/ATP合成酶）活性定量檢測試劑盒
