一、主要用途

上海哈靈生物植物組織膜性囊泡（RSOV 和 IOV）制備試劑是一種旨在通過(guò)差速離心技術(shù)從植物組織中分離出各種正常外向膜性囊泡（Right - side out；RSOV）和內(nèi)側(cè)外翻膜性囊泡（In - side out；IOV）組分的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明。其適合于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）、胚胎葉（cotyledon）、上胚軸（epicotyl）等膜性囊泡的制備。其制備物產(chǎn)量高，可用于膜通道、信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制、膜蛋白分布等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，即到即用，性能穩(wěn)定，分離產(chǎn)量和純度俱佳。

二、技術(shù)背景

上海哈靈生物膜性囊泡（membrane vesicle）分成正常外向膜性囊泡（Right - side out；RSOV）和內(nèi)側(cè)外翻膜性囊泡（In - side out；IOV）。正常外向膜性囊泡是通過(guò)去除細(xì)胞漿內(nèi)容物，使之失去內(nèi)在的代謝系統(tǒng)，同時(shí)保持質(zhì)膜的原始位相，有利于提供適合的底物，不會(huì)受到降解和代謝，建立動(dòng)力機(jī)制，進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)或攝入研究，例如微粒體組分用于 V 型 ATP 酶研究、線(xiàn)粒體組分用于 F 型 ATP 酶研究。而內(nèi)側(cè)外翻膜性囊泡是通過(guò)裂解細(xì)胞和細(xì)胞器后，質(zhì)膜重新閉合形成內(nèi)側(cè)面外翻的囊泡狀結(jié)構(gòu)，廣泛用于原發(fā)性轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的研究。

三、產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）：[X] 毫升

平衡液（Reagent B）：[X] 毫升

保存液（Reagent C）：[X] 毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)：1 份

四、保存方式

保存保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里。

其余的保存在 4℃冰箱里；有效保證 6 月。

五、用戶(hù)自備

15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器。

1.5 毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器。

4℃超速離心機(jī)：用于分離膜性囊泡。

DOUNCE 勻漿器：用于裂解組織。

六、實(shí)驗(yàn)步驟

（一）正常外向膜性囊泡分離（線(xiàn)粒體和微粒體）

準(zhǔn)備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定 1 克組織重量。

（選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管。

（選擇步驟）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次。

移入一個(gè)液氮凍存管。

即刻放入液氮罐過(guò)夜。

次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）。

放進(jìn)一個(gè) 15 毫升錐形離心管。

加入 xx 毫升預(yù)冷的平衡液（Reagent B）。

渦旋震蕩 5 秒，充分混勻。

即刻放入預(yù)冷的 DOUNCE 勻漿器。

在冰槽里用研磨棒勻化組織（約 80 下）。

將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管。

放進(jìn) 4℃臺(tái)式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 1000g。

小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管。

放進(jìn) 4℃臺(tái)式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 10000g。

小心移出上清液到 2 個(gè)新的 1.5 毫升離心管，同時(shí)保留沉淀顆粒。

加入 xx 微升保存液（Reagent C）到沉淀顆粒管――

將含有上清液的 2 個(gè) 1.5 毫升離心管放進(jìn) 4℃超速離心機(jī)離心 60 分鐘，速度為 100000g。

小心抽去上清液。

分別加入 xx 微升保存液（Reagent C）――

移取 10 微升進(jìn)行蛋白質(zhì)定量測(cè)定（注意：建議使用 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1）。

即刻放進(jìn)－70℃冰箱里保存。

（二）內(nèi)側(cè)外翻膜性囊泡分離（質(zhì)膜分離）

準(zhǔn)備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定 1 克組織重量。

（選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管。

（選擇步驟）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次。

移入一個(gè)液氮凍存管。

即刻放入液氮罐過(guò)夜。

次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）。

放進(jìn)一個(gè) 15 毫升錐形離心管。

加入 xx 毫升預(yù)冷的平衡液（Reagent B）。

渦旋震蕩 5 秒，充分混勻。

即刻放入預(yù)冷的 DOUNCE 勻漿器。

在冰槽里用研磨棒勻化組織（約 80 下）。

將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管。

放進(jìn) 4℃臺(tái)式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 1000g。

小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管。

放進(jìn) 4℃臺(tái)式離心機(jī)離心 30 分鐘，速度為 10000g。

小心抽去上清液。

加入 xx 微升保存液（Reagent C）――

連續(xù)－70℃至 37℃凍融 4 次――

移取 10 微升進(jìn)行蛋白質(zhì)定量測(cè)定（注意：建議使用 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1）。

即刻放進(jìn)－70℃冰箱里保存。

（選擇步驟）進(jìn)行 IOV 組分純化（建議使用 IOV 膜性囊泡高質(zhì)純化試劑盒－10170）。

七、注意事項(xiàng)

本產(chǎn)品為 20 次（1 克植物組織）操作。

所有操作均須在 4℃或以下?tīng)顟B(tài)進(jìn)行。

建議使用足夠的樣品量。

通常 1 克植物組織的微粒體組分含量為 50 毫克蛋白，線(xiàn)粒體組分含量 5 毫克蛋白，100 毫克質(zhì)膜。

質(zhì)膜 IOV 組分為粗提分離產(chǎn)物，其中含有 RSOV 和未予閉合的質(zhì)膜不等，如果需要獲得 95％以上的高純度的 IOV，建議使用 IOV 膜性囊泡高質(zhì)純化試劑盒－10170。

純化的樣品避免反復(fù)凍融。

本公司提供系列離子膜通道轉(zhuǎn)運(yùn)功能（transport/uptake）分析試劑產(chǎn)品。

八、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定。

本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離組分維持正常活性。

本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶。